أسلوب نانوحبيبات الفضي للتخفيف من حدة المتلازمة الكبدية الصفراوية في الفئران
Summary
توضح هذه المقالة بالتفصيل أسلوب يقوم على جسيمات نانوية فضية لتخفيف المتلازمة الكبدية الصفراوية في طراز ماوس الكبدية الصفراوية تجريبية. سوف يساعد فهم راسخ لعملية إعداد كاشف وتقنية حقن الفأر الولدان تعريف الباحثين بالطريقة التي استخدمت في دراسات نموذجية الماوس الأطفال حديثي الولادة.
Abstract
الكبدية الصفراوية (BA) هو نوع شديد من التهاب الأوعية الصفراوية مع ارتفاع معدل الوفيات في الأطفال منها المسببات: هو لا تزال غير مفهومة تماما. الالتهابات الفيروسية قد يكون أحد الأسباب المحتملة. يحدد نموذج الحيوان النموذجية المستخدمة لدراسة درجة البكالوريوس تطعيم ماوس حديثي الولادة مع فيروس روتا الريسوسي. جسيمات فضة نانوية قد ثبت أن ممارسة تأثيرات مضادة للجراثيم والمضادة للفيروسات؛ يتم تقييم وظيفتها في طراز الماوس با في هذه الدراسة. حاليا، في التجارب على الحيوانات با، الأساليب المستخدمة لتحسين أعراض الفئران با الأعراض عموما علاجات تعطي عن طريق الأغذية أو الأدوية الأخرى. الهدف من هذه الدراسة هو إظهار أسلوب جديد لتخفيف متلازمة با في الفئران بحقن داخل جسيمات فضة نانوية وتوفير طرق مفصلة لإعداد صياغة جل نانوحبيبات الفضة. هذه الطريقة بسيطة وقابلة للتطبيق على نطاق واسع ويمكن استخدامها لإجراء بحوث إليه مكتبة الإسكندرية، وكذلك في العلاج السريري. استناداً إلى نموذج الماوس با، عند الفئران يحمل اليرقان، هلام نانوحبيبات الفضة استعداد يتم حقن إينترابيريتونيلي على سطح الكبد أقل. لوحظ في حالة البقاء على قيد الحياة، وهي دراسة المؤشرات البيوكيميائية والتشريح المرضى الكبد. يسمح هذا الأسلوب فهم أكثر بديهية لكلا إنشاء نموذج با ورواية با العلاج.
Introduction
با شكل من ركود صفراوي تتسم باستمرار اليرقان وارتفاع معدل الوفيات في غياب زرع الكبد. الالتهابات الفيروسية ترتبط ارتباطاً وثيقا بالآلية المرضية لمكتبة الإسكندرية. الفيروس المضخم للخلايا، ريوفيروس، وفيروس روتا جميعا قد اقترحت كممرضات في مكتبة الإسكندرية1،،من23. خلال فترة الوليد، استجابة النظام المناعي غير ناضجة لالتهاب فيروسي يؤدي إلى التقلبات محصنة ضد القنوات الصفراوية إضافية-وأحيانا، مما يؤدي إلى استموات الخلايا الظهارية الصفراوية، تسلل الخلايا الملتهبة في المدخل المنطقة، وانسداد القناة الصفراوية أحياناً واكستراهيباتيك، وأخيراً، تليف الكبد4،،من56.
نموذج الحيوان استخداماً للدراسات با ينطوي على تلقيح ماوس الوليد بفيروس الروتا الريسوسي (RRV). عادة ما تضع الماوس اليرقان بعد 5-6 أيام، عرض على وزن جسم منخفض والبراز أتشوليك. ويتمثل دور الاستجابة المناعية في عملية المرض الحرجة، خاصة بالنسبة للخلايا (ناغورني كاراباخ) القاتل الطبيعية؛ استنفاد هذه الخلايا مع الأجسام المضادة NKG2D يقلل كثيرا من الأضرار التي يسببها با7. وعلاوة على ذلك، الخلايا الأخرى، بما في ذلك خلايا CD4+ تي خلايا CD8+ تي الخلايا والخلايا الجذعية والخلايا التائية التنظيمية، الجميع تبين أن تلعب أدواراً في المرض8،9،،من1011. كافة البيانات تشير إلى طبيعة الجهاز المناعي أثناء با لا غنى عنه.
جسيمات فضة نانوية (أجنبس) أثبتت أن تكون لها آثار مفيدة ضد بعض الأمراض المعدية، بما في ذلك12 من الإصابات البكتيرية والالتهابات الفيروسية13،،من1415. بيد عدا استخدام الأمراض الجلدية، ودراسات قليلة استخدمت أجنبس في علاج السريري، معظمهم بسبب سميتها المحتملة. في التجارب على الحيوانات، وقد درس الباحثون عموما فعالية أجنبس تدار عن طريق الفم16 أو17من طرق الحقن الوريدي. ومع ذلك، لا باحثين آخرين درسوا فعالية أجنبس تدار عن طريق حقنه داخل (القائمة) في الماوس الولدان والتجارب، الذي هو طريقة بسيطة وسريعة تؤدي إلى تأثير مباشر أكثر في الكبد والقناة الصفراوية أثناء تقليل السمية إلى أنظمة أخرى مثل نظام المناعة. أجنبس قد ثبت أن تؤثر على نشاط الخلية ناغورني كاراباخ18؛ ولذلك، نحن اختبار الآثار العلاجية من أجنبس تدار عن طريق الحقن القائمة في نموذج الماوس با.
Protocol
Representative Results
Discussion
أجنبس يحمل خصائص مضادة للجراثيم واسعة الطيف قوية ونفاذيه قوية22؛ بالإضافة إلى ذلك، يتم استخدامها لإنتاج مجموعة من المنتجات المضادة للبكتيريا الطبية23. ومع ذلك، أجنبس يمكن أن يستغرق وقتاً طويلاً لمسح مرة واحدة أنها تتراكم في الأعضاء، واستمرار هذه قد تؤدي إلى تأثي?…
Disclosures
The authors have nothing to disclose.
Acknowledgements
وكانت أجنبس المستخدمة هنا هدية من جيم تشي م. في قسم الكيمياء، جامعة هونغ كونغ. تم تمويل هذا العمل من قبل مؤسسة العلوم الطبيعية الوطنية الصينية (رقم 81600399) والعلوم والتكنولوجيا المشروع من قوانغتشو (No.201707010014).
Materials
| BALB/c mouse | Guangdong Medical Experimental Animal Center | SYXK2017-0174 | Animal experiment |
| Rhesus rotavirus (RRV) | ATCC | ATCC VR-1739 | Establish biliary atresia mouse model |
| MA104 cells | ATCC | ATCC CRL-2378.1 | For laboratory use only |
| DMEM | Thermo Fisher | 10569010 | Mammalian Cell Culture |
| Fetal Bovine Serum | Thermo Fisher | 10099141 | Mammalian Cell Culture |
| collagen Type I | CORNING | 354236 | For research use only |
| PBS buffer | OXOID | BR0014G | For washing |
| NaOH | Sigma | 1310-73-2 | Adjust the PH value |
| AgNP | Antibacterial Note: The AgNps was a gift from Prof CM Che. in the Department of Chemistry, the University of Hong Kong. |
||
| Insulin syringe with integrated needle | BD | 9161635S | For medical use |
| 15-mL Centrifuge Tube | Corning | 430791 | For laboratory use only |
| 1.5-mL Microcentrifuge Tube | GEB | CT0200-B-N | For laboratory use only |
| Microscope | Nikon | ECLIPSE-Ci | For laboratory use |
| Dissecting/Intravital microscope | Nikon | SMZ 1000 | For laboratory use |
| anti-Mouse NKp46 FITC | eBioscience | 11-3351 | For research use only |
| anti-Mouse CD4 PE-Cyanine5 | eBioscience | 15-0041 | For research use only |
| Monoclonal Mouse Anti-Human CD4 | DAKO | 20001673 | For research use only |
| anti-NKG2D | RD | MAB1547 | For research use only |
| BD FACSCanto Flow Cytometer | BD Biosciences | FACS Canto Plus | For laboratory use only |
References
- Szavay, P. O., Leonhardt, J., Czechschmidt, G., Petersen, C. The role of reovirus type 3 infection in an established murine model for biliary atresia. European Journal of Pediatric Surgery. 12 (04), 248-250 (2002).
- Coots, A., et al. Rotavirus infection of human cholangiocytes parallels the murine model of biliary atresia. Journal of Surgical Research. 177 (2), 275-281 (2012).
- Shanmugam, N. P., Jayanthi, V. Biliary atresia with cytomegalovirus. Indian Pediatrics. 49 (2), 157 (2012).
- Mack, C. L., Feldman, A. G., Sokol, R. J. Clues to the Etiology of Bile Duct Injuryin Biliary Atresia. Seminars in Liver Disease. 32, 307-316 (2012).
- Muraji, T., Suskind, D. L., Irie, N. Biliary atresia: a new immunological insight into etiopathogenesis. Expert Review of Gastroenterology & Hepatology. 3 (6), 599-606 (2009).
- Sokol, R. J., Mack, C. Etiopathogenesis of Biliary Artesia. Seminars in Liver Disease. 21, 517-524 (2001).
- Shivakumar, P., Sabla, G. E., Whitington, P., Chougnet, C. A., Bezerra, J. A. Neonatal NK cells target the mouse duct epithelium via Nkg2d and drive tissue-specific injury in experimental biliary atresia. Journal of Clinical Investigation. 119 (8), 2281-2290 (2009).
- Mack, C. L., et al. Oligoclonal expansions of CD4+ and CD8+ T-cells in the target organ of patients with biliary atresia. Gastroenterology. 133 (1), 278-287 (2007).
- Shivakumar, P., et al. Effector Role of Neonatal Hepatic CD8 + Lymphocytes in Epithelial Injury and Autoimmunity in Experimental Biliary Atresia. Gastroenterology. 133 (1), 268-277 (2007).
- Saxena, V., et al. Dendritic Cells Regulate Natural Killer Cell Activation and Epithelial Injury in Experimental Biliary Atresia. Science Translational Medicine. 3 (102), (2011).
- Miethke, A. G., et al. Post-natal paucity of regulatory T cells and control of NK cell activation in experimental biliary atresia. Journal of Hepatology. 52 (5), 718-726 (2010).
- Tian, J., et al. Topical delivery of silver nanoparticles promotes wound healing. ChemMedChem. 2 (1), 129-136 (2010).
- Lu, L., et al. Silver nanoparticles inhibit hepatitis B virus replication. Antiviral Therapy. 13 (2), 253-262 (2008).
- Xiang, D., et al. Inhibition of A/Human/Hubei/3/2005 (H3N2) influenza virus infection by silver nanoparticles in vitro and in vivo. International Journal of Nanomedicine. 8 (Issue 1), 4103-4114 (2013).
- Elechiguerra, J. L., et al. Interaction of silver nanoparticles with HIV-1. Journal of Nanobiotechnology. 3 (1), 1-10 (2005).
- Nallanthighal, S., et al. Differential effects of silver nanoparticles on DNA damage and DNA repair gene expression in Ogg1-deficient and wild type mice. Nanotoxicology. 11 (8), 1-16 (2017).
- Wen, H., et al. Acute toxicity and genotoxicity of silver nanoparticle in rats. PLoS One. 12 (9), e0185554 (2017).
- Zhang, R., et al. Silver nanoparticle treatment ameliorates biliary atresia syndrome in rhesus rotavirus inoculated mice. Nanomedicine. 13 (3), 1041-1050 (2017).
- Arnold, M., Patton, J. T., McDonald, S. M. Culturing, Storage, and Quantification of Rotaviruses. Current Protocols in Microbiology. , (2009).
- Liu, X., et al. Silver nanoparticles mediate differential responses in keratinocytes and fibroblasts during skin wound healing. ChemMedChem. 5 (3), 468-475 (2010).
- Zhang, R., et al. Silver nanoparticles promote osteogenesis of mesenchymal stem cells and improve bone fracture healing in osteogenesis mechanism mouse model. Nanomedicine. 11 (8), 1949-1959 (2015).
- Wu, J., Hou, S., Ren, D., Mather, P. T. Antimicrobial properties of nanostructured hydrogel webs containing silver. Biomacromolecules. 10 (9), 2686-2693 (2009).
- Xu, L. Genotoxicity and molecular response of silver nanoparticle (NP)-based hydrogel. Journal of Nanobiotechnology. 10 (1), 16 (2012).
- Dobrzyńska, M. M., et al. Genotoxicity of silver and titanium dioxide nanoparticles in bone marrow cells of rats in vivo. Toxicology. 315 (1), 86-91 (2014).
- Mohamed, H. R. H. Estimation of TiO 2 nanoparticle-induced genotoxicity persistence and possible chronic gastritis-induction in mice. Food & Chemical Toxicology. 83 (9), 76-83 (2015).
