Forma de nanopartículas de plata para paliar el síndrome de Atresia biliar en ratones
Summary
Este artículo describe detalladamente un método basado en nanopartículas de plata para paliar el síndrome de atresia biliar en un modelo experimental de atresia biliar en ratones. Una sólida comprensión del proceso de preparación de reactivos y la técnica de inyección neonatal ratón ayudará a familiarizar a los investigadores con el método utilizado en estudios con ratones neonatales modelo.
Abstract
Atresia biliar (BA) es un tipo grave de colangitis con alta mortalidad en los niños de que la etiología es todavía no comprendida. Las infecciones virales pueden ser una posible causa. El típico modelo animal utilizado para el estudio de BA se establece por inocular un ratón neonatal con un rotavirus de rhesus. Nanopartículas de plata se ha demostrado para ejercer efectos antibacterianos y antivirales; en este estudio se evaluó su función en el modelo de ratón de BA. Actualmente, en experimentos con animales BA, los métodos utilizados para mejorar los síntomas de los ratones de BA son tratamientos sintomáticos generalmente dada a través de alimentos o a otros medicamentos. El objetivo de este estudio es para demostrar un nuevo método para paliar el síndrome de BA en ratones por la inyección intraperitoneal de nanopartículas de plata y para proporcionar métodos detallados para la preparación de la formulación de gel de nanopartículas de plata. Este método es simple y ampliamente aplicable y se puede utilizar para investigar el mecanismo de BA, así como en tratamientos clínicos. Basado en el modelo de ratón de BA, cuando los ratones presentan ictericia, el gel de nanopartículas de plata preparada se inyecta por vía intraperitoneal a la superficie del hígado más bajo. Se observa el estado de supervivencia, y se examinan los indicadores bioquímicos y la histopatología hepática. Este método permite una comprensión más intuitiva de ambos el establecimiento del modelo de BA y nuevos tratamientos de BA.
Introduction
BA es una forma de colestasis caracterizada por ictericia persistente y tiene alta mortalidad en ausencia de trasplante hepático. Las infecciones virales están estrechamente asociadas con la patogénesis de BA. El citomegalovirus, reovirus y rotavirus se han sugerido como patógenos en BA1,2,3. Durante el período neonatal, la respuesta del sistema inmune inmaduro a una infección viral produce dysregulation inmune contra extra – e intrahepáticos biliares, conduce a la apoptosis de la célula epitelial biliar, infiltración de células inflamatorias en el portal área, obstrucción del conducto biliar intrahepático y extrahepático y por último, fibrosis hepática4,5,6.
El modelo animal utilizado para estudios de licenciatura implica la inoculación del ratón neonatal con el rotavirus de rhesus (RRV). El ratón normalmente desarrolla ictericia después de 5-6 días, mostrando un bajo peso corporal y heces acólicas. El papel de la respuesta inmune en el proceso de la enfermedad es fundamental, especialmente para las células naturales del asesinas (NK); el agotamiento de estas células con el anticuerpo anti-NKG2D reduce considerablemente el daño provocado por el BA7. Además, otras células, incluyendo CD4+ T células de CD8,+ T las células, las células dendríticas y células T reguladoras, han demostrado que desempeñan un papel en la enfermedad8,9,10,11. Todos los datos sugieren el carácter imprescindible del sistema inmune en el curso de BA.
Nanopartículas de plata (AgNPs) se han demostrado para tener efectos beneficiosos contra algunas enfermedades infecciosas, incluyendo infecciones bacterianas12 y las infecciones virales13,14,15. Sin embargo, que no sean de uso dermatológico, pocos estudios han utilizado AgNPs en un tratamiento clínico, sobre todo debido a su potencial toxicidad. En experimentos con animales, los investigadores generalmente han estudiado la eficacia de AgNPs administrado via oral16 o métodos intravenosos17. Sin embargo, otros investigadores no han estudiado la eficacia de AgNPs administrado mediante una inyección intraperitoneal (i.p.) en ratones neonatales experimentos, que es un método simple y rápido hacia un efecto más directo sobre el hígado y vías biliares mientras que la reducción de la toxicidad a otros sistemas, como el sistema inmunológico. AgNPs se han demostrado para afectar NK célula actividad18; por lo tanto, hemos probado los efectos terapéuticos de AgNPs administrado vía inyección i.p. en el modelo de ratón de BA.
Protocol
Representative Results
Discussion
AgNPs exhiben potentes propiedades antibacterianas de amplio espectro y una permeabilidad fuerte22; Además, se utilizan para producir una gama de productos médicos antibacteriano23. Sin embargo, AgNPs puede tomar mucho tiempo para borrar una vez que se acumulan en órganos, y esta persistencia puede conducir a efectos tóxicos24,25. Un estudio examinó la toxicidad aguda y genotoxicidad de AgNPs después de una in…
Disclosures
The authors have nothing to disclose.
Acknowledgements
AgNPs aquí fueron un regalo de C. M. Che en el Departamento de química, Universidad de Hong Kong. Este trabajo fue financiado por la Fundación Nacional de Ciencias naturales de China (Nº 81600399), ciencia y tecnología proyecto de Guangzhou (No.201707010014).
Materials
| BALB/c mouse | Guangdong Medical Experimental Animal Center | SYXK2017-0174 | Animal experiment |
| Rhesus rotavirus (RRV) | ATCC | ATCC VR-1739 | Establish biliary atresia mouse model |
| MA104 cells | ATCC | ATCC CRL-2378.1 | For laboratory use only |
| DMEM | Thermo Fisher | 10569010 | Mammalian Cell Culture |
| Fetal Bovine Serum | Thermo Fisher | 10099141 | Mammalian Cell Culture |
| collagen Type I | CORNING | 354236 | For research use only |
| PBS buffer | OXOID | BR0014G | For washing |
| NaOH | Sigma | 1310-73-2 | Adjust the PH value |
| AgNP | Antibacterial Note: The AgNps was a gift from Prof CM Che. in the Department of Chemistry, the University of Hong Kong. |
||
| Insulin syringe with integrated needle | BD | 9161635S | For medical use |
| 15-mL Centrifuge Tube | Corning | 430791 | For laboratory use only |
| 1.5-mL Microcentrifuge Tube | GEB | CT0200-B-N | For laboratory use only |
| Microscope | Nikon | ECLIPSE-Ci | For laboratory use |
| Dissecting/Intravital microscope | Nikon | SMZ 1000 | For laboratory use |
| anti-Mouse NKp46 FITC | eBioscience | 11-3351 | For research use only |
| anti-Mouse CD4 PE-Cyanine5 | eBioscience | 15-0041 | For research use only |
| Monoclonal Mouse Anti-Human CD4 | DAKO | 20001673 | For research use only |
| anti-NKG2D | RD | MAB1547 | For research use only |
| BD FACSCanto Flow Cytometer | BD Biosciences | FACS Canto Plus | For laboratory use only |
References
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