Иммуностимулирующее агент оценки: Лимфоидной ткани добычи и инъекций маршрут зависимых дендритные клетки активации
Summary
После лечения иммуностимулирующее Наноматериал описаны экспериментальные процедуры для последующего извлечения лимфатической тканей для проверки активации лимфоидных дендритных клеток.
Abstract
Для оценки нового терапевтического агента для иммунотерапии или вакцинации анализ активации иммунных клеток в лимфатических тканей. Здесь, мы исследовали иммунологические эффекты иммуностимулирующим Роман липидов ДНК в виде наночастиц из администрации различных маршрутов в мышь: устные, интраназально, подкожно, зверолов, внутрибрюшинного и внутривенно. Эти инъекции непосредственно повлияет на иммунный ответ и уборки лимфатической ткани и анализ активации дендритных клеток (DC) в тканях, решающие части этих оценок. Извлечение лимфоузлов средостения (mLNs) важных, но довольно сложным из-за размера и расположения этого органа. Описана пошаговая процедура для уборки паховых лимфоузлов (iLN), млн и селезенки и анализа DC активации подачей cytometry.
Introduction
Достижения в области иммунологии и наноматериалов привели к обилие потенциальных новых терапевтических стратегий для приложений в биомедицине, включая поставку наркотиков и иммуностимуляция. Оптимизация администрирования маршрут является одним из важнейших аспектов, влияющих на эффективность иммуностимулирующее агентов. Иммуностимулирующее наночастиц (ИНП), состоящий из ДНК является недавно разработанный нано иммунной адъюванта, самостоятельно собранные микрофазовую разделения из-за структуры амфифильных липидов ДНК1. Таким образом протоколы для INP, с участием администрации материала1 в естественных условиях через различные маршруты и три процедуры для сбора соответствующих тканей, такие как паховых лимфоузлов (iLN), средостения LN (млн.) и селезенки, описал. Наконец эти ткани были проанализированы для активации дендритных клеток (DC), наиболее мощный антиген представляющих клеток в иммунной системе. Этот протокол также может применяться для оценки антигенов, антител или другие иммунные адъювантов2.
Мы протестировали ИЯФ формулировку потому, что он является агентом, который показал большие надежды. ИЯФ является Толл подобный рецептор 9 (TLR9) материал адъювант, содержащий нуклеиновые кислоты, для которых оценки иммуностимуляция эффективности требуется для тестирования различных инъекций методы3. В этом контексте стимуляция DCs является мощным конечной точки для оценки в естественных условиях . После того, как антиген или иммуностимулирующее молекулы являются phagocytosed DCs в периферических тканях и крови, эти клетки мигрируют в лимфоидных органов, таких как селезенке и LNs4,5. Таким образом DC активации был проанализирован в селезенке, iLN и млн вводят животных. Должным образом заготовка этих тканей поэтому также крайне важно для оценки иммунного ответа на роман адъювантом или патогенов5. Такие ткани уборки также имеет важное значение для разработки Роман иммунологические методологии как терапия рака. Кроме того этот протокол может использоваться для проверки эффективности других препаратов, таких как вирус иммунодефицита человека анти терапии6.
Protocol
Representative Results
Discussion
Многие достижения в области нанотехнологий и иммунологии были достигнуты благодаря терапевтических исследований лекарств и иммуностимуляция. Тщательный подбор метода инъекций известен имеет важное значение для иммуностимуляция, который был в центре внимания настоящего исследован?…
Disclosures
The authors have nothing to disclose.
Acknowledgements
Это исследование было поддержано творческие материалы открытие программы через национальных исследований фонда из Кореи (NRF) финансируется министерством науки, ИКТ и будущего планирования (СР 2017M3D1A1039421) и морской биотехнологии программой, финансируемой Министерство океанов и рыболовства, Республика Корея и Грант (20150220).
Materials
| Material | |||
| phosphate buffer saline | Corning | 21-040-CVR | Washing organs |
| (PBS, pH 7.4) | |||
| isoflurane solution | Aesica Queenborough limited | 26675-46-7 | Anesthesia process |
| Tuberculin 1mL syringe – | Junglim | N/A | Injection |
| 50 mL conical tube | S.P.L | 50050 | Anesthesia process |
| 1mL Insulin Syringe | (BD Ultra-FineTMII)_short needle | 324826 | Intramuscular Injection |
| DMEM High Glucose | Hyclone | SH30081.01 | Storing organs |
| Histopaque | Sigma-Aldrich | 10771 | FACS analysis |
| Ethyl alcohol anhydrous 99.5 % | Daejung | 4022-4110 | Disinfectant |
| Equipments | |||
| FineCycler C100 (Thermocycler) | Ssufine | – | Anealing |
| Centrifuge | Centrifuge | ||
| FACS tube | FALCON | 2052 | FACS analysis |
| Automated High-performance Flow Cytometer | BD (USA), FACSVerse | – | FACS analysis |
References
- Park, H. . Preparation of dodecynyl modified DNA nanoparticles with unmethylated CpG adjuvant and ovalbumin for immunostimulation. , (2016).
- Jin, J. O., Park, H., Zhang, W., de Vries, J. W., Gruszka, A., Lee, M. W., Ahn, D. R., Herrmann, A., Kwak, M. Modular delivery of CpG-incorporated lipid-DNA nanoparticles for spleen DC activation. Biomaterials. 115, 81-89 (2017).
- Pal, I., Ramsey, J. D. The role of the lymphatic system in vaccine trafficking and immune response. Advanced Drug Delivery Reviews. 63 (10-11), 909-922 (2011).
- Jin, J. O., Kwak, M., Xu, L., Kim, H., Lee, T. H., Kim, J. O., Liu, Q., Herrmann, A., Lee, P. C. W. Administration of soft matter lipid-DNA nanoparticle as the immunostimulant via multiple routes of injection in vivo. ACS Biomaterial Science & Engineering. 3 (9), 2054-2058 (2017).
- Worbs, T., Hammerschmidt, S. I., Förster, R. Dendritic cell migration in health and disease. Nature Review Immunology. 17 (1), 30-48 (2017).
- Milling, S. W. F., Jenkins, C., MacPherson, G. Collection of lymph-borne dendritic cells in the rat. Nature Protocols. 1 (5), 2263-2270 (2006).
- Desormeaux, A., Bergeron, M. G. Lymphoid tissue targeting of anti-HIV drugs using liposomes. Methods in Enzymology. 391, 330-351 (2005).
- Machholz, E., Mulder, G., Ruiz, C., Corning, B. F., Pritchett-Corning, K. R. Manual restraint and common compound administration routes in mice and rats. Journal of Visualized Experiments. (67), (2012).
- Turner, P. V., Brabb, T., Pekow, C., Vasbinder, M. A. Administration of substances to laboratory animals: routes of administration and factors to consider. Journal of the American Association for Laboratory Animal Science. 50 (5), 600-613 (2011).
- . . General anesthesia of mice and rats. , (2016).
- . . Guidelines for the Euthanasia of Animals. , (2013).
- . JoVE Science Education Database. Lab Animal Research. Compound Administration I. Journal of Visualized Experiments. , (2018).
- . JoVE Science Education Database. Lab Animal Research. Compound Administration III. Journal of Visualized Experiments. , (2018).
- Mebius, R. E., Kraal, G. Structure and function of the spleen. Nature Review Immunology. 5 (8), 606-616 (2005).
