Immunostimulantes Agent Evaluation : Lymphoïde tissu Extraction et Injection Route-dépendante des cellules dendritiques Activation
Summary
Les procédures expérimentales pour l’extraction ultérieure des tissus lymphatiques pour tester l’activation des cellules dendritiques lymphoïdes sont décrites après traitement d’un nanomatériau immunostimulante.
Abstract
Pour l’évaluation d’un nouvel agent thérapeutique pour l’immunothérapie ou vaccination, il est essentiel d’analyse de l’activation de cellules immunitaires dans les tissus lymphatiques. Ici, nous avons étudié les effets immunologiques d’un immunostimulant roman lipide-ADN sous forme de nanoparticules de voies d’administration différentes chez la souris : orale, par voie nasale, sous-cutanée, coussinet plantaire, intrapéritonéale et par voie intraveineuse. Ces injections influenceront directement la réponse immunitaire et la récolte des tissus lymphatiques et analyse de l’activation des cellules dendritiques (DC) dans les tissus sont des éléments essentiels de ces évaluations. L’extraction des ganglions lymphatiques médiastinaux (mLNs) est important mais assez complexe à cause de la taille et l’emplacement de cet organe. On décrit une méthode progressive pour récolte le ganglion inguinal (iLN), mLN et la rate et l’analyse d’activation DC par cytométrie en flux.
Introduction
Avancées en immunologie et nanomatériaux ont conduit à une abondance de potentielles nouvelles stratégies thérapeutiques pour les applications en biomédecine, y compris l’immunostimulation et délivrance de médicaments. Optimisation de la voie d’administration est un aspect vital affectant l’efficacité des agents immunostimulantes. Une NANOPARTICULE immunostimulantes (INP) composé de l’ADN est un adjuvant de nano-immunitaire nouvellement développé Self-assemblé microphase séparation à cause de la structure amphiphile de lipide-ADN1. Par conséquent, les protocoles pour INP touchant l’administration du matériel1 in vivo par des voies différentes et trois procédures pour la récolte des tissus appropriés tels que le ganglion inguinal (iLN), médiastinale LN (mLN) et la rate, sont décrit. Enfin, ces tissus ont été analysés pour l’activation des cellules dendritiques (DC), les cellules présentatrices d’antigène plus puissants dans le système immunitaire. Ce protocole peut également être appliqué pour l’évaluation des antigènes, anticorps ou autres adjuvants immunitaires2.
Nous avons testé la formulation de l’INP, parce que c’est un agent qui a montré de grandes promesses. INP est un récepteur Toll-like 9 (TLR9) matériel adjuvant qui contient des acides nucléiques, pour laquelle évaluation d’immunostimulation efficacité est nécessaire pour tester l’injection différentes méthodes3. Dans ce contexte, la stimulation de la DCs est un puissant point de terminaison pour in vivo de l’évaluation. Après que les molécules de l’antigène ou immunostimulantes sont phagocytées par les contrôleurs de domaine dans les tissus périphériques ou le sang, ces cellules migrent vers les organes lymphoïdes comme la rate et le LNs4,5. Ainsi, activation de DC a été analysée dans la rate et iLN mLN des animaux injectées. Correctement la cueillette de ces tissus est donc aussi cruciale pour l’évaluation de la réponse immunitaire à un adjuvant ou agents pathogènes nouveaux5. La récolte de ces tissus est aussi importante pour le développement d’une nouvelle méthodologie immunologique comme une thérapie contre le cancer. En outre, ce protocole peut être utilisé pour vérifier l’efficacité d’autres médicaments, tels que les virus de l’immunodéficience humaine thérapeutique6.
Protocol
Representative Results
Discussion
Nombreuses avancées en nanotechnologie et en immunologie ont été obtenues par le biais de la recherche thérapeutique de l’administration de médicaments et d’immunostimulation. Une sélection rigoureuse de la méthode d’injection est connue pour être importante pour l’immunostimulation, qui a fait l’objet de la présente étude.
Itinéraires d’injection différentes ont été évalués pour un naturellement non toxiques et biodégradable basées sur l’ADN matériel, INP (imm…
Disclosures
The authors have nothing to disclose.
Acknowledgements
Cette recherche a été financée par le programme de découverte de matériaux créatifs grâce à la Fondation de la recherche nationale de Corée (NRF) financé par le ministère de la Science, les TIC et les futur Planning (FRO-2017M3D1A1039421) et par programme de biotechnologie Marine, financé par le Ministère des Océans et pêches, République de Corée et une subvention (20150220).
Materials
| Material | |||
| phosphate buffer saline | Corning | 21-040-CVR | Washing organs |
| (PBS, pH 7.4) | |||
| isoflurane solution | Aesica Queenborough limited | 26675-46-7 | Anesthesia process |
| Tuberculin 1mL syringe – | Junglim | N/A | Injection |
| 50 mL conical tube | S.P.L | 50050 | Anesthesia process |
| 1mL Insulin Syringe | (BD Ultra-FineTMII)_short needle | 324826 | Intramuscular Injection |
| DMEM High Glucose | Hyclone | SH30081.01 | Storing organs |
| Histopaque | Sigma-Aldrich | 10771 | FACS analysis |
| Ethyl alcohol anhydrous 99.5 % | Daejung | 4022-4110 | Disinfectant |
| Equipments | |||
| FineCycler C100 (Thermocycler) | Ssufine | – | Anealing |
| Centrifuge | Centrifuge | ||
| FACS tube | FALCON | 2052 | FACS analysis |
| Automated High-performance Flow Cytometer | BD (USA), FACSVerse | – | FACS analysis |
References
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