هضم البروتين، أولترافيلتراتيون، وحجم الاستبعاد اللوني لتحسين عزل اكسوسوميس من بلازما الدم البشري والمصل

اكسوسوميس نانوفيسيكليس (يتراوح حجمها بين 30 نانومتر إلى 150 nm) نشرته تقريبا جميع الخلايا الموجودة في جسم الإنسان لتسهيل الاتصالات خلية إلى خلية العمليات^1،2. من المثير للاهتمام، التغييرات تكوين اكسوسوميس تبعاً لخلايا المنشأ، فضلا عن الحالة الصحية ل الفرد^3،4،5. بالإضافة إلى ذلك، اكسوسوميس يمكن استردادها من سوائل بيولوجية عديدة مثل: اللعاب والبول والدم². وبسبب هذه الميزات، تعتبر اكسوسوميس يكون مصدرا جيدا للمؤشرات الحيوية في الأمراض. ولسوء الحظ، لا يوجد أي أسلوب القياسية لعزل اكسوسوميس. النظر بعض معامل الطرد المركزي متعددة الخطوات، مع خطوة عالية السرعة نهائية في س 100,000 ز استخدام التدرجات الكثافة كأسلوب المعيار الذهبي لعزل اكسوسومي. ومع ذلك، أظهرت دراسات أجريت مؤخرا أن تنبيذ فائق الحث على تجميع اكسوسوميس مع البروتينات القابلة للذوبان وأخرى اكسوسوميس، بالإضافة إلى التأثير على سلامة اكسوسومي، التي قد تعوق تطبيقات المصب^6،7 . تشمل أساليب أخرى مشتركة من العزلة اكسوسومي، ولكن لا تقتصر على: هطول الأمطار بالتجاري البولي إثيلين غليكول (شماعة) على أساس الكواشف والطرد المركزي أولترافيلتريشن وحجم الاستبعاد اللوني (ثانية). إثراء الكواشف التجارية استخدام البوليمرات البولي إثيلين غليكول (شماعة) اكسوسوميس التي تسبب لهم أن يعجل وتشكيل من بيليه. قيود استخدام هذا البوليمر تلوث ببقايا شماعة البوليمر، ووفرة من البروتينات اكسوسومال غير قابلة للذوبان في المنتج النهائي. ويستخدم أولترافيلتريشن الطرد المركزي لتنقية وتركز حويصلات استخدام غشاء السليولوز؛ يتم الاحتفاظ اكسوسوميس فوق عامل التصفية، بينما أصغر من الشوائب والبروتينات الأخرى تمر عبر غشاء^7،8. تماما مثل أساليب أخرى، قد أولترافيلتراتيون الطرد المركزي قدرة محدودة على تنقية اكسوسوميس بسبب الاحتفاظ بمستويات عالية من البروتينات غير اكسوسومال، بما في ذلك مجمعات البروتين والمجاميع. وأخيراً، يستخدم تنقية ثانية راتنج مسامية لفصل الجزيئات بحجم. ثانية وقد أظهرت نتائج واعدة، التغلب على معظم المشاكل التي تعاني منها مع الأساليب الأخرى التي استولت على غالبية البروتينات الملوث والحفاظ على سلامة اكسوسومال، منذ عزل استناداً إلى خطورة أو أنظمة الضغط المنخفض^{7، 9}. ومع ذلك، يؤثر عزلة أكبر المجاميع والبروتينات الدهنية البروتين¹⁰ المشارك خلال ثانية نقاء إعداد اكسوسومي النهائي. في حين تم اختبار بعض الأساليب لتنقية اكسوسومي من supernatants ثقافة الخلية والبلازما⁷أو^9،البلازما فقط¹¹، لا توجد معلومات حول أداء طرق مباشرة مقارنة الدم البلازما والمصل من الفرد نفسه.

هنا، علينا أن نركز على تنقية الدم اكسوسوميس بمقارنة مجموعة متنوعة من مهام سير العمل لتحديد ما إذا كانت تقنيات التخصيب حويصلة قابل للنقل بين البلازما والمصل. نانوحبيبات تتبع التحليل ووصمة عار الغربية استخدمت لقياس الاختلافات في تكوين اكسوسومي التركيز والنقاء والبروتين في المنتجات النهائية. يزيد أرقام حويصلة الأسلوب النهائي، المفصلة في هذا البروتوكول، ويقلل من مستويات البروتين غير اكسوسومال. الأهم من ذلك، هو أظهر انخفاض حاد للبروتينات عجلت المشترك المشتركة بما في ذلك الزلال وأبوليبوبروتينس. وفرة عالية من هذه البروتينات اثنين في الدم وتواتر فيه أنها شاركت تنقية مع اكسوسوميس أسباب التضارب بين عينات “النقية”، وانحراف التحليلات المتلقين للمعلومات. ويشمل هذا البروتوكول استخدام راتنج SEC المتوفرة تجارياً؛ وتتألف من الخرز المليئة بالثغرات التي يمكن أن تدخل البروتينات أقل من 700 كاتشين الخرز الراتنج. مرة واحدة في الداخل، يتم الاحتفاظ بالبروتينات قبل يجند أوكتيلاميني. النذرة يتكون من اكسوسوميس وجزيئات أكبر من 700 كاتشين¹². بالإضافة إلى ذلك، بغية الحد من المجاميع البروتين وأبوليبوبروتينس التي تهرب حبة الملائمة، ندرج خطوة هضم حوزتي في سير العمل. حاليا، هناك لا توجد تقنية واحدة قادرة على تحقيق الحد الأقصى من الغلة اكسوسومي بينما الحد المشترك تنقية البروتينات غير اكسوسومال. وتبين هذه الدراسة أن بروتوكول تنقية يجمع بين المعالجة هضم حوزتي مع أساليب الاسترداد وتنقية متعددة يمكن استخدامها لزيادة الغلة اكسوسومي والنقاء من مصل الدم والبلازما.