Biz enfeksiyon antikor bağımlı geliştirme tarafından Zika virüs nekahat serum dang virüs muhabir Viral parçacıkların kullanarak ölçmek için basit ve kolay bir iletişim kuralı tanımlamak.
Antikor bağımlı geliştirme enfeksiyon Dang viral patogenezinde önemli bir rol oynamaktadır göstermiştir. Antikorlar veya serum enfeksiyon söyleyebileceğin hücre hatlarında geliştirmek kapasitesini ölçmek geleneksel deneyleri üzerinde kullanarak viral çıkış plak deneyleri tarafından takip medya enfeksiyon ölçmek için güveniyorlar. Son zamanlarda, bu deneyleri dang virüs (DENV) enfeksiyonu fluorescently etiketli antikorları kullanarak hücre hatlarında inceledik. Her iki bu yaklaşım bu teknikler yaygın kullanımı kısıtlamak kısıtlamalar bulunmaktadır. Burada, biz yeşil flüoresan protein ve K562 hücreleri antikor bağımlı geliştirme (ADE) DENV enfeksiyon rhesus elde edilen serum kullanarak incelemek için hızlı dang virüs muhabir viral parçacıkların (RVPs) kullanarak bir basit vitro tahlil tarif maymunların Zika virüs (ZIKV) ile enfeksiyon sonra 16 hafta. Bu teknik güvenilirdir, hücreleri en az manipülasyonu içerir, canlı çoğaltma yetkili virüs kullanımı gerektirmez ve Akış Sitometresi kullanarak bir nicel okuma almak için yüksek işlem hacmi biçimde gerçekleştirilebilir. Ayrıca, bu tahlil kolayca antikor bağımlı geliştirme (ADE) sarı humma virüsü (YFV), Japon Equine Ensefalit virüsü (JEEV), Batı Nil virüsü (WNV) burada RVPs kullanılabilir vb gibi diğer flavivirus enfeksiyonların incelemek için adapte edilebilir. Tahlil ayarlama kolaylığı, veri analizi ve sonuçları yorumlama çoğu laboratuvar ayarları için son derece uysal yapar.
Antikor bağımlı geliştirme (ADE) enfeksiyon sayede virüs serotip tarafından indüklenen kısmen cross-reactive antikor yanıt artırır artan viral çoğaltma ve viremi yol virüs, başka bir serotip alımını bir süreçtir. ADE kapsamlı dang virüs (DENV) enfeksiyonları dört büyük serotipleri yaygın nerede belgelemiştir. Hastaların alt kümede, ADE Dang kanamalı ateşi (DHF) ile ilişkilidir. Biz son zamanlarda Zika virüs (ZIKV) enfeksiyon DENV ADE içinde vitro neden oldu ve büyük olasılıkla DENV viremi vivo içinde1 iyileştirmesini katkıda DENV cross-reactive antikor yanıt düzeyi önemli ölçüde yüksek indüklenen göstermiştir , 2. antikor bağımlı geliştirme deneyleri vardır ilgili virüs ile ikincil enfeksiyon geliştirmek ve flavivirus enfeksiyonlarının patogenezinde içine değerli bilgiler sağlamak ve bilgilendirmek için antikorlar kapasitesini değerlendirmek için değerli bir araç aşıların geliştirilmesi.
Açıklanan tahlil DENV RVPs enfeksiyon için normalde söyleyebileceğin K562 hücreleri ile birlikte burada kullanır. RVPs tek bir çoğaltma3turdan sonra ifade edilir bir alt genomik yeşil flüoresan protein (GFP) replicon kodlamak yapısal olarak sağlam çoğaltma beceriksiz DENV viral parçacıkların vardır. Bu nedenle, RVPs ile enfekte olma hücreleri yeşil bulabilsem ve Akış Sitometresi veya mikroskobu kullanılarak kolayca algılanabilir. Bu tahlil kullanılan RVPs ticari kaynaklardan elde edilmiştir. Onlar ancak, olabilir diğer virüslere karşı oluşturulan ve bu el yazması açıklanan tahlil kullanılır. Bu arada, K562 hücreler antikorlar Fc bölgesine bağlamak ve alt antikor4,5konsantrasyonları nötralize huzurunda bulaşabilir bir FcγIII reseptör ifade lösemi hücre satırı vardır.
ADE deneyleri kapsamlı bir şekilde kullanıldığını şiddetli Dang ve vitro ADE mekanizmaları betimlemek için risk faktörleri araştıran çalışmalarda6,7,8. Burada açıklanan ADE tahlil vitro enfeksiyon RVPs kullanarak geliştirmek ve Akış Sitometresi ile karşılaştırıldığında ya gerektiren kullanılmakta, diğer deneyleri plak şekillendirme belirlenmesi için serum kapasitesini belirlemek için hızlı ve kolay kullanılabilir ikisi de zaman alıcı ve emek hücreleri6,7,8,9,10,11, birimleri (pfu) Vero hücreleri veya bir antikor boyama enfekte yoğun.
Flaviviruses DENV ve ZIKV gibi önemli kanıt homoloji birbirleri ile13,14cross-react antikor üreten her iki onların yapısal ve yapısal olmayan proteinlerde paylaşmak. Bu cross-reactive antikor yanıt-e doğru geliştirmek gösterilmiştir enfeksiyonu ile ilgili vivo içinde ve vitro Contegra serotip veya diğer flaviviruses1,2. Çapraz enfeksiyon geliştirmek için potansiyel hasta…
The authors have nothing to disclose.
Açıklanan proje JJM için Uniformed Hizmetleri Üniversitesi Sağlık Bilimleri Enstitüsü’nden fon tarafından desteklenmiştir. Görüş ya da burada yer alan iddialar yazarların özel olanları ve resmi veya yansıtıcı olarak görüşlerini Savunma Bakanlığı, Uniformed Hizmetleri Üniversitesi Sağlık Bilimleri Enstitüsü veya başka bir Ajansı ABD olmak yorumlanacaktır değildir Hükümet.
WGV tüm deneylerin gerçekleştirilen ve veri analiz; JJM tasarlamış ve çalışma denetlenir; WGW ve JJM kağıt yazdı.
DENV 1-4 RVP | Integral Molecular | RVP-501 | |
K562 cells | ATCC | CCL-243 | |
RPMI | Corning | 10-040-CV | |
FBS | GE lifesceinces | SH 30910.03 | 10% FBS in RPMI-10 |
Penicillin-Streptomycin | MP biomedicals | 1670049 | 100 IU Pen/mL, 100 ug Strep/mL in RPMI-10 |
HEPES | Cellegro | 25-060-Cl | 0.025M in RPMI-10 |
MEM Non-essential Amino Acid Solution (100×) | Sigma | M7145 | 1x in RPMI-10 |
Sodium Pyruvate | Cellegro | 25-000-Cl | 1mM in RPMI-10 |
L-glutamine | Fisher Scientific | MT25005CI | |
Sterile V-bottom plates | Thomas Scientific | 333-8001-01V | |
BD Falcon Polypropylene 5 ml FACS tubes | VWR | 60819-728 | |
Non-sterile U-bottom plates | Falcon | Ref 353910 | A high throughput alternative to FACS tubes |
5mL, sterile, serological pipette | Denville | P7127 | |
200uL sterile pipette tips | Denville | P3020 CPS | |
20uL sterile pipette tips | Denville | P1121 | |
50-200uL multichannel pipette | Denville | P3975-8-B | |
5-50uL multichannel pipette | Denville | P3975-9-B | |
20% formadehyde | Tousimis | #1008B | |
Water Bath | ThermoFisher | TSCOL35 | |
thermomixer | Eppendorf | 2231000387 | An alternative to a waterbath for heat inactivation |
CO2 Incubator | ThermoFisher | 13-998-213 | |
Ethanol | Sigma Aldrich | E7023 | |
Liquid Bleach | Fisher Scientific | NC9724348 | |
Flowjo 9.8 | TreeStar, Inc. | Flow cytometry analysis software | |
BD FACSDiva 6.1.2 | Becton Dikinson | ||
BD LSR II flow cytometer | Becton Dikinson | ||
Liquid Bleach | Fisher Scientific | NC9724348 |