Formação de grânulos condrogénicos a partir de células-tronco pluripotentes induzidas por sangue do cordão umbilical

O uso de hiPSCs representa uma nova estratégia para rastreamento de drogas e estudos mecanicistas de várias doenças. Do ponto de vista regenerativo, os hiPSCs também são uma fonte potencial para a substituição de tecidos danificados que têm capacidade de cura limitada, como a cartilagem articular ^{1 , 2} .

A regeneração da cartilagem articular nativa tem sido um desafio há várias décadas. A cartilagem articular é um tecido macio e branco que abaixa a extremidade dos ossos, protegendo-os da fricção. No entanto, tem habilidade regenerativa limitada quando danificada, o que torna o auto-reparo quase impossível. Portanto, as pesquisas voltadas para a regeneração da cartilagem estão em curso há várias décadas.

Anteriormente, a diferenciação in vitro na linhagem condrogênica geralmente era realizada com BMSC ou condrocitos nativos isolados da articulação do joelho ³ . Devido tO seu potencial condrogênico, BMSCs e condrócitos nativos têm inúmeros méritos que suportam seu uso na condrogênese. No entanto, devido à sua expansão limitada e fenótipo instável, essas células enfrentam várias limitações na reconstrução de defeitos da cartilagem articular. Sob condições de cultura in vitro , essas células tendem a perder suas próprias características após 3-4 passagens, o que eventualmente afeta suas habilidades de diferenciação ⁴ . Além disso, no caso de condrócitos nativos, danos adicionais na articulação do joelho são inevitáveis ​​na obtenção dessas células.

Ao contrário de BMSCs ou condrócitos nativos, os hiPSCs podem expandir-se indefinidamente in vitro . Com as condições de cultura adequadas, os hiPSCs têm um grande potencial como fonte de substituição para a diferenciação condrogênica. No entanto, é um desafio mudar as características intrínsecas dos hiPSCs ⁵ . Além disso, é necessário vários in vitro complicadosPs para direcionar o destino dos hiPSCs para um tipo de célula específico. Apesar dessas complicações, o uso de HiPSCs ainda é recomendado devido às suas altas habilidades de auto-renovação e sua capacidade de se diferenciar em células específicas, incluindo condrócitos ⁶ .

A diferenciação condrogénica é geralmente feita com sistemas de cultura tridimensionais, como a cultura de pelotização ou a cultura de micromassas, usando células progenitoras semelhantes a MSC. Se estiver usando o HiPSCs, o protocolo para gerar células progenitoras do tipo MSC difere dos protocolos existentes. Alguns grupos usam cultura monocamada de hiPSCs para converter diretamente o fenótipo em células tipo MSC ⁷ . No entanto, a maioria dos estudos usa EBs para gerar células de crescimento que se assemelham aos MSC ^{8 , 9 , 10 , 11} .

Vários tipos de fatores de crescimento são usados ​​para induzir ChondrogeNesis. Geralmente, as proteínas da família BMP e TGFβ são usadas, sozinhas ou em combinação. A diferenciação também foi induzida com outros fatores, como GDF5, FGF2 e IGF1 ^{12 , 13 , 14 , 15} . Foi demonstrado que TGFβ1 estimula a condrogênese de uma maneira dose-dependente em MSCs ¹⁶ . Comparado com o outro isotipo, TGFβ3, TGFβ1 induz condrogênese, aumentando a condensação da célula pré-cartilagea mesenquimatosa.TGFβ3 induz condrogênese aumentando significativamente a proliferação celular mesenquimatosa ¹⁷ . No entanto, o TGFβ3 é utilizado mais frequentemente por pesquisadores do que TGFβ1 ^{7 , 10 , 18 , 19} . BMP2 aumenta a expressão de genes relacionados aos componentes da matriz condrogênica em humanosCondrócitos articulares sob condições in vitro ²⁰ . BMP2 aumenta a expressão de genes críticos para a formação de cartilagem em MSCs em combinação com proteínas TGFβ ²¹ . Também foi demonstrado que BMP2 melhora sinergicamente o efeito do TGFβ3 através das vias Smad e MAPK ²² .

Neste estudo, os CBMC-hiPSCs foram agregados em EBs usando meio EB em uma placa Petri de baixo valor. As células de ultrapassagem foram induzidas ao unir os EBs a um prato revestido com gelatina. A diferenciação condrogénica utilizando células secundárias foi realizada por cultura de pelota. O tratamento com BMP2 e TGFβ3 condensou com sucesso as células e induziu a acumulação de proteína da matriz extracelular (ECM) para a formação de grânulos condrogénicos. Este estudo sugere um protocolo de diferenciação condrogénica simples, mas eficiente, usando CBMC-hiPSCs.