разведение<em> Черноногий клещ,</em> Черный ноги Tick: Кормление незрелых стадий на мышах
Summary
Производство здоровых лабораторными выращены клещи необходимо исследования по клещу биологии, и тик-патоген взаимодействий. Здесь мы демонстрируем простой протокол для незрелого кормления клеща, что является экономически эффективными и менее напряженным для мышей.
Abstract
Ixodes scapularis , вектор болезни Лайма, является одним из наиболее важных переносчиков заболеваний в восточной и среднезападной части Соединенных Штатов. Этот вид представляет собой трёхмерный клещ, для которого требуется кровь из позвоночного хозяина для каждой стадии развития, а взрослым самкам требуется кровь для размножения. Клещи личинок прикрепляются к хозяину в течение 3 – 5 дней для кормления и высадки хозяина при полном насыщении. Эта зависимость от нескольких разных хостов и длительное время присоединения для нагрубания затрудняет выращивание клещей в лабораторных условиях. Тем не менее, чтобы понять биохимию клещей и клещевые патогенные взаимодействия, производство здоровых, лабораторно выращенных клещей очень важно. Здесь мы демонстрируем простой, рентабельный протокол для незрелого клещевого кормления на мышах. Мы модифицировали существующие протоколы для снижения стресса у мышей и увеличили успех клещей и выживаемость, используя одноразовые клетки без дна сетки, чтобы избежать контакта клещей wiЙ воды, загрязненной мочой мышей и фекалиями.
Introduction
Клещи являются обязательными гематофагическими эктопаразитами позвоночных и распространены во всем мире. В Соединенных Штатах, по крайней мере, 11 видов клещей являются переносчиками патогенов, имеющих важное значение для общественного здоровья 1 . Ixodes scapularis ответственен за передачу нескольких патогенов, таких как возбудители болезни Лайма ( Borrelia burgdorferi ), рецидивирующая лихорадка ( B.miyamotoi), гранулоцитарный анаплазмоз человека ( Anaplasma phagocytophilum ) и бабезиоз (Babesia spp.). Несмотря на важность I. scapularis как вектор болезни, сбор этих паукообразных в изобилии из дикой природы для исследований в лаборатории не всегда возможен. Таким образом, производство здоровых лабораторных клещей имеет важное значение для изучения биологии клещей и клещевого патогенного взаимодействия.
Жизненный цикл всех тяжелых клещей (семейство Ixodidae), включая I. scapularis, состоит из яйца и трех активныхЕ стадии: личинка, нимфа и взрослый. Каждая активная стадия питается позвоночным хозяином. Сложные взаимодействия, которые происходят между клещами и их хозяевами в течение нескольких дней прикрепления и кормления, почти невозможны для репликации с использованием искусственных фидеров, и вряд ли они обеспечат достаточное количество сытых клещей для массового выращивания 2 , 3 , 4 . Поэтому живые мыши и кролики чаще всего используются в качестве хозяев для выращивания незрелых (личинок и нимф) и зрелых стадий (взрослых) клещей, соответственно. Требование множественных хостов для кроветворения в течение каждой стадии развития усложняет клещевое разведение и требует значительных затрат времени и средств 5 , 6 , 7 . Большинство протоколов размножения клещей требуют удерживания мышей в клетке 7 или 8 в подвесной проволочной сетке или в цилиндрическом саGE таких размеров , что животное не может свободно перемещаться и жених себя 6, 9, 10.
Эти цилиндрические клетки, которые затем переносили в обувной коробке клетку с проволочной сеткой. Напитавшиеся, отдельные клещи затем собирает из воды под ним. Тем не менее, этот метод приводит к обнажая кормили клещей воды , загрязненной мочой и калом , которые могут увеличить рост грибковой и тикают смертность 9. Кроме того, это увеличивает возможность клеща выхода из воды желоба, а также вызывает стресс у мышей. Чтобы обойти эти проблемы, мы здесь демонстрируем личиночное кормление клеща на мышах в течение пластик коробки типа одноразовых клеток. Этот метод позволяет нормальное поведение мышей, увеличивается напитавшихся восстановление тик, тик и уменьшает смертность вследствие загрязнения.
Protocol
Representative Results
Discussion
Критические шаги в рамках Протокола
Важно иметь несколько уровней мер безопасности при выращивании клещей, чтобы избежать случайного выхода. Использование липкой ленты и водяного рва имеет решающее значение для обеспечения безопасности. Важно держать анестезированную…
Disclosures
The authors have nothing to disclose.
Acknowledgements
The authors acknowledge the help from the staff of Laboratory Animal Medicine, University of Nevada, Reno. MM received funding from Nevada INBRE.
Materials
| Puralube vet ointment | Amazon | Available from any Pet store or online store | |
| Disposable mouse cage | Innovive, San Diego, CA | MV 2 | Set of bottom and lid |
| White Alpha dri bedding | Lab Supply, Fort Worth, TX | ALPHA-Dri™ |
References
- Gleim, E. R., et al. Factors associated with tick bites and pathogen prevalence in ticks parasitizing humans in Georgia, USA. Parasites & Vectors. 9 (125), 1-13 (2016).
- Krober, T., Guerin, P. M. In vitro feeding assays for hard ticks. Trends Parasitol. 23 (9), 445-449 (2007).
- Kuhnert, F. Feeding of Hard Ticks In Vitro: New Perspectives for Rearing and for the Identification of Systemic Acaricides. ALTEX. 13 (2), 76-87 (1996).
- Voigt, W. P., et al. In vitro feeding of instars of the ixodid tick Amblyomma variegaturn on skin membranes and its application to the transmission of Theileria mutans and Cowdria ruminantium. Parasitol. 107, 257-263 (1993).
- Gregson, J. D., Smith, C. N. Ticks. Insect Colonization and Mass Production. , 49-72 (1966).
- Sonenshine, D. E. . Biology of Ticks. 2, (1993).
- Bouchard, K. R., Wikel, S. K., Marquaedt, W. C. Care, maintenance, and experimental infestation of ticks in the laboratory setting. Biology of Disease Vectors. , 705-711 (2005).
- Schumaker, T. S., Barros, D. M. Life cycle of Ornithodoros (Alectorobius) talaje. (Acari:Argasidae) in laboratory. J Med Entomol. 32, 249-254 (1995).
- Banks, C. W., Oliver, J. H., Hopla, C. E., Dotson, E. M. Laboratory life cycle of Ixodes woodi (Acari:Ixodidae). J. Med. Entomol. 35, 177-179 (1998).
- James, A. M., Oliver, J. H. Feeding and host preference of immature Ixodes dammini,I.scapularis,and I.pacificus.(Acari:Ixodidae). J. Med. Entomol. 27, 324-330 (1990).
