Shear stress investigations on an oil-water emulsion system result in drop breakup over the experimental time. To count drop sizes in pumping processes, the suitability of inline endoscopy was successfully demonstrated in this protocol.
Насосы используются в основном при передаче стерильные культуры отвары в биофармацевтических и биотехнологических процессов производства. Тем не менее, в процессе закачки поперечные силы возникают, которые могут привести к качественному и / или количественного потери продукта. Для расчета механических напряжений с ограниченной экспериментальной счет, система эмульсии масло-вода использовалась, которого пригодность была продемонстрирована размер капель обнаружений в биореакторах 1. Как падение распад системы нефть-вода эмульсии является функцией механического напряжения, падение размеры должны быть подсчитаны в течение времени эксперимента от напряжения сдвига исследований. В предыдущих исследованиях, рядный эндоскопия было показано, что точная и надежная методика измерения для размера капли обнаружений в жидкость / жидкость дисперсий. Цель этого протокола, чтобы показать пригодность методики встроенного эндоскопии для измерения размера капель в насосных процессов. Для того, чтобы выразить размер капли, Саутера средний диаметрD 32 использовали в качестве представительного диаметром капель в масло-вода эмульсии. Результаты показали низкую вариацию в средних диаметров Sauter, которые были определены количественно с помощью стандартных отклонений ниже 15%, что указывает на надежность измерительной техники.
Насосы используются для передачи клеточных культур в фармацевтических и биотехнологических производств. В процессе откачки, механическое напряжение может привести к необратимому повреждению клеток, которые могут ухудшить качество и количество продукта 1-4. Уровень механических напряжений зависит от настроек типа насоса и насоса, как показано в предыдущих исследованиях 5-6. Обычно, перистальтические, шприцев и мембранные насосы используются для одноразовых приложений, основанных технологий (СУ). Эти насосы привести к высокой локальной силы сдвига, вызванного сжатием трубы насоса и пульсирующего потока 7.
Для того, чтобы преодолеть эти недостатки, магнитной подвеске центробежные насосы (центробежные насосы MagLev) представляют собой многообещающую альтернативу. Двигатель с магнитным приводом для того, чтобы избежать узких зазоров между рабочим колесом и корпусом насоса (рис 1). Предыдущее исследование исследовали MagLev центробежныенасосы и показал низкую механическую нагрузку в клетках яичника китайского хомячка (СНО), по сравнению с перистальтической и 4-поршневые мембранные насосы 5. Кроме того, гемолиз анализы не выявили существенного травмы крови и тромбов формирования на различных условиях эксплуатации с использованием этих насосов 8-11. Результаты показывают, что использование этих специально разработанных насосов применяется меньше механическое напряжение на биологические системы по сравнению с перистальтических и мембранных насосов. Чтобы исследовать механическое напряжение с ограниченной экспериментальной счет, система эмульсии модель нефть-вода рекомендуется из-за его экономически (около 99,8%) и времени уменьшается (около 99,5%) по сравнению с применением биологических систем культивирования клеток.
Как капля распад системы масло-вода эмульсию функция механического напряжения, падение размеры должны быть подсчитаны по экспериментальной время напряжения сдвига исследований. Многие методы калибровки капли доступны, жHICH могут быть разделены на звук, лазера и методов, основанных фото 12. В частности, использование фото-оптический датчик встроенного эндоскопии показывает почти одинаковые размеры капель для ручных и автоматических обнаружений (стандартное отклонение ниже 10%) и позволяет обнаружение 250 капель в минуту 13. Из-за своей точности и надежности, техника эндоскоп было показано, чтобы быть эффективным стандартный метод измерения для распределений размера капли в жидких / жидкое дисперсий по сравнению с другими широко используемыми датчиками (например, волоконно-оптические вперед-назад-коэффициент () датчик FBR , сфокусированный луч метод отражения (FBRM) и двумерная оптическая методика измерения отражения (2D-ОРМ)) 12,14. Кроме того, пригодность встроенного эндоскопии для измерения размеров капель в сосуде с мешалкой было продемонстрировано несколько раз в предыдущих исследованиях 15-18.
На основе предварительного исследования 6, этот протокол описываетИспользование встроенного эндоскопии, чтобы определить размеры капель (Саутера средний диаметр) из эмульсионной системы масло-вода в насосах. Sauter средний диаметр был использован в качестве критерия сравнения для оценки механическое напряжение из многофункционального (MU) MagLev центробежных насосов, перистальтический и одноразовой (SU) 4-поршневого диафрагменного насоса.
Рисунок 1. магнитной подвеске центробежный насос-системы. () Принцип несущего двигателя и (б) PuraLev 200MU показаны в качестве примера. Пожалуйста, нажмите здесь, чтобы посмотреть большую версию этой фигуры.
Цель этого протокола, чтобы показать пригодность методики встроенного эндоскопии для измерения размера капель в насосных процессов. Для этого, падение размеров системы эмульсии масло-вода были определены и измерены Саутера средний диаметр был рассчитан охарактеризовать механическое напряжение в магнитной подвеске центробежных насосов, а также их коллеги, перистальтические и 4-поршневым насосом диафрагмы. Результаты показали, низкое изменение измеренного Sauter средний диаметр, который количественно с помощью стандартных отклонений ниже 15%, что указывает на размер капель были надежно и точно измерить. Как следствие, измеренная Sauter средний диаметр успешно может быть использован в качестве критерия сравнения для оценки механической нагрузки насосов исследованных. Маглев центробежные насосы показал большие измеренные Sauter средний диаметр, указывая низкие механические напряжения на эмульсионных капель по сравнению с перистальтических и 4-поршневые насосы мембранные. В шпильких годов до настоящего времени, встроенный эндоскопии было показано, чтобы быть надежным и простым методом для надежной измерения размера капель 1,6,12-14,20-21, который также было подтверждено в данном исследовании. По сравнению с альтернативными методами измерений, таких как волокна оптического датчика FBR, FBRM и метод 2D-ОРМ, техника эндоскоп может быть использован в качестве стандартного метода для получения точных данных в жидкость / жидкость приложений 12,14.
Легкое обращение с инлайн эндоскопии и простой производства небиологических системы водонефтяной эмульсии позволяет простой процедуры размера капли обнаружений в соответствии с текстом протокола (см. Выше) Тем не менее, следует отметить, что положение эндоскопа зонда зависит от потока жидкости в емкости для хранения. Дальнейшие исследования (данные не показаны) показали, что объектив зонда должна быть расположена непосредственно под впускной трубой для более низких скоростей потока до 5 л мин -1для того, чтобы избежать многократного обнаружение одной капли 19. Для резких изображений при расходе более 5 л мин -1, то рекомендуется расположить зонд, по крайней мере в 10 см от впускной трубы. Независимо от параметров процесса, владелец встроенного эндоскопии должна быть стабильной, чтобы избежать смещение зонда, который может привести к смазыванию изображений.
Кроме того, в частности, следует отметить, что размер капель обнаружено близка к нижнему пределу обнаружения приложенного фото-оптической системы, где минимальный регистрируемый диаметр капель на 6,5 мкм. Как производитель-прилагаемое программное обеспечение было улучшено, методы встроенный эндоскопии может надежно обнаруживать минимальный размер капли 1 мкм. Кроме того, обработка изображения будет дальнейшее развитие для того, чтобы онлайн-мониторинг промышленных приложений.
В то время как настоящее исследование было сосредоточено на относительно низких скоростях потока до 3,4 л 60; мин -1, будущие исследования должны рассматривать более широкий диапазон условий эксплуатации. Первые исследования были проведены при расходе до 20 л мин -1 (данные не показаны). Тем не менее, 1: 2 разведения (с поверхностно = 0,09 мл L-1, с маслом = 0,64 мл L-1) системы масло-водной эмульсии рекомендуется при расходе более 10 л мин -1 19, как увеличение падения распада вызвана более высокой механической нагрузки в противном случае повлиять обнаружения падения и уменьшить количество капель обнаруженных. Испытания проводились с разведении 1: 2 и по сравнению с результатами неразбавленной системы эмульсии масло-вода. Для обоих подходов, Саутера значит диаметры были надежно измерена (стандартное отклонение ниже 5%). Таким образом, уменьшается объемная доля (1: 2 разведение) не влияют на измеренное Саутера означает диаметр, и, таким образом падение падение распад был незначительным.
нт "> Эти мощные экспериментальные подходы обеспечивают хорошую основу для совершенствования техники эндоскопии, а также соответствующего программного обеспечения захвата изображений, распознавания и результат анализатора. Кроме того, пригодность методики эндоскопии классифицировать типы насосов и ряд в соответствии с их механической стресс успешно продемонстрировали. Полученные результаты имеют важное значение для разработки дизайна насоса и оптимизации насосов для уменьшения повреждения клеток.The authors have nothing to disclose.
Авторы хотели бы поблагодарить Комиссию по технологиям и инновациям (CTI, Швейцария) за финансовую поддержку (№ 13236,1 PFFLI-LS).
CCD camera | Allied Vision Technologies GmbH | GX2750 | Equipment for inline endoscopy |
C-Flex Biopharmaceutical Tubing | Saint-Gobain Performance Plastics | 374-375-4 | Tube Select a tubing length of about 45 cm before the pump. |
C-Flex Biopharmaceutical Tubing | Saint-Gobain Performance Plastics | 374-375-3 | Tube Select a tubing length of about 45 cm after the pump and clamp on the flow sensor to this tubing. |
CLAVE Connector | Victus | 011-C2000 | Sampling port |
Controller LPC-200.1-02 | Levitronix GmbH | 100-30030 | PuraLev 200MU controller |
Controller LPC-600.1-02 | Levitronix GmbH | 100-30033 | PuraLev 600MU controller |
LeviFlow Clamp-On Sensor LFSC-12 | Levitronix GmbH | 100-30329 | Flow sensor for flow rates below 5 L min-1 |
LeviFlow Converter LFC-1C-CS | Levitronix GmbH | 100-30328 | Flow sensor output device |
Masterflex I/P Easy Load | Fisher Scientific AG | EW-77963-10 | Peristaltic pump |
Mitos free flow valve | Parker Hannifin Europe Sàrl | FFLQR16S6S6AM | Valve |
Mobil Eal Arctic | Exxon Mobil Corporation | Mobil EAL Arctic 22 | Oil Prepare the emulsion directly before the experiment. |
Motor | Elektromotorenwerk Brienz AG | 7WAC72N4THTF | Motor for agitator shaft |
Motor BSM-1.4 | Levitronix GmbH | 100-10005 | PuraLev 200MU motor |
Motor LPM-600.4 | Levitronix GmbH | 100-10038 | PuraLev 600MU motor |
Norm-Ject 10 mL Luer Lock | Restek Corporation | 22775 | Syringe |
Pump Head LPP-200.5 | Levitronix GmbH | 100-90525 | PuraLev 200MU pump head |
Pump Head LPP-600.18 | Levitronix GmbH | 100-90548 | PuraLev 600MU pump head |
Quattroflow 1200-SU | Almatechnik AG | QF 1200 | 4-piston diaphragm pump |
SciPres Sensor | SciLog | 080-695PSX | Pressure sensor |
SciPres Sensor Monitor | SciLog | 080-690 | Pressure sensor output device |
SOPAT-VF Inline Endoscopic Probe | SOPAT GmbH | Inline endoscopy | |
Stroboscope | Drello GmbH & Co KG | Drelloscop 255-01 | Equipment for inline endoscopy |
Triton X-100 | Sigma-Aldrich | X100 | Surfactant Handle with gloves and goggles. (acute toxicity, eye irritation) |