Shear stress investigations on an oil-water emulsion system result in drop breakup over the experimental time. To count drop sizes in pumping processes, the suitability of inline endoscopy was successfully demonstrated in this protocol.
Le pompe sono utilizzati principalmente per il trasferimento brodi di coltura sterile nei processi di produzione biofarmaceutici e biotecnologiche. Tuttavia, durante il processo di pompaggio forze di taglio si verificano che può portare alla perdita qualitativa e / o quantitativa prodotto. Per calcolare lo stress meccanico con spese sperimentale limitato, un sistema di emulsione acqua-olio è stato utilizzato, la cui idoneità è stata dimostrata per rilevazioni di dimensioni caduta in bioreattori 1. Come goccia rottura del sistema di emulsione olio-acqua è funzione della sollecitazione meccanica, goccia dimensioni devono essere contati nel tempo sperimentale delle indagini sforzo di taglio. In studi precedenti, l'endoscopia linea ha dimostrato di essere una tecnica accurata e affidabile misurazione per rilevamenti formato goccia a dispersioni liquido / liquido. L'obiettivo di questo protocollo è quello di mostrare l'idoneità della tecnica endoscopica in linea per goccia misurazioni dimensionali nei processi di pompaggio. Per esprimere la dimensione della goccia, la Sauter diametro mediod 32 è stato utilizzato come il diametro rappresentante gocce in emulsione olio-acqua. I risultati hanno mostrato bassa variazione dei diametri medi Sauter, quantificati dalla deviazione standard di sotto del 15%, indicando l'affidabilità della tecnica di misura.
Le pompe sono usati per trasferire colture cellulari nelle industrie farmaceutiche e biotecnologiche. Durante il processo di pompaggio, stress meccanico può causare danni cellulari irreversibili, che potrebbero compromettere la quantità e la qualità del prodotto 1-4. Il livello di stress meccanico dipende dalle impostazioni del tipo di pompa e pompa, come dimostrato in studi precedenti 5-6. Comunemente, peristaltici, siringa e diaframma pompe sono utilizzate per monouso applicazioni basate su tecnologia (SU). Queste pompe producono elevate forze di taglio locale causati dalla compressione del tubo della pompa e il flusso pulsante 7.
Per superare questi inconvenienti, pompe centrifughe a levitazione magnetica (pompe centrifughe MagLev) costituire una promettente alternativa. Il motore è azionato magneticamente per evitare spazi ristretti tra la girante e il corpo pompa (Figura 1). Un precedente studio ha indagato la centrifuga MagLevpompe e ha mostrato sollecitazioni meccaniche inferiore in ovaio di criceto cinese (CHO) cellule rispetto alle pompe a membrana peristaltica e 4 pistoncini 5. Inoltre, le analisi non hanno rivelato emolisi significativo trauma sangue e trombo formazione su una gamma di condizioni operative che utilizzano queste pompe 8-11. I risultati dimostrano che l'uso di queste pompe specificamente progettati applica meno sollecitazioni meccaniche sui sistemi biologici in confronto con le pompe peristaltiche e membrana. Per studiare lo stress meccanico con spese sperimentale limitato, un sistema modello emulsione acqua-olio è raccomandato per la sua economicità (circa 99,8%) e in tempo ridotto (circa 99,5%) applicazione rispetto ai sistemi di colture cellulari biologici.
Come goccia rottura del sistema di emulsione olio-acqua è funzione della sollecitazione meccanica, goccia dimensioni devono essere contati nel tempo sperimentale delle indagini sforzo di taglio. Molte tecniche per il dimensionamento gocce sono disponibili, which possono essere suddivisi in suono, laser e tecniche di fotografia a base 12. In particolare, l'uso della foto-ottico sonda linea endoscopia mostra le dimensioni di goccia quasi identiche per rilevamenti manuale e automatico (deviazione standard inferiore al 10%) e consente un rilevamento di 250 gocce al minuto 13. A causa della sua precisione e affidabilità, la tecnica dell'endoscopio ha dimostrato di essere una tecnica di misura standard efficace per distribuzioni dimensionali goccia a dispersioni liquide / liquido quando confrontato con altre sonde comunemente utilizzati (ad esempio, fibra ottica avanti-indietro-ratio (FBR) Sensore , fascio concentrato metodo di riflessione (FBRM) e la tecnica di misura ottica riflettanza bidimensionali (2D-ORM)) 12,14. Inoltre, l'idoneità di endoscopia in linea per la determinazione delle misure goccia in un recipiente agitato è stato dimostrato più volte in precedenti indagini 15-18.
Sulla base di uno studio preliminare 6, questo protocollo descrivel'uso della linea endoscopia per determinare le dimensioni di goccia di un sistema di emulsione olio-acqua nelle pompe (Sauter diametro medio). Il diametro medio Sauter è stato utilizzato come criterio di confronto per valutare lo stress meccanico delle multiuso (MU) pompe centrifughe MagLev, una peristaltica e monouso (SU) pompa a membrana 4-pistone.
Figura 1. levitazione magnetica centrifuga pompa-system. (A) Il principio di un motore senza cuscinetti e (B) il PuraLev 200mu sono mostrati come esempio. Clicca qui per vedere una versione più grande di questa figura.
L'obiettivo di questo protocollo è quello di mostrare l'idoneità della tecnica endoscopica in linea per goccia misurazioni dimensionali nei processi di pompaggio. A questo scopo, goccia dimensioni di un sistema di emulsione olio-acqua sono stati determinati e un diametro medio Sauter misurata è stata calcolata per caratterizzare la sollecitazione meccanica della centrifuga MagLev pompe, così come i loro omologhi, un peristaltica e una pompa a membrana 4-pistone. I risultati hanno mostrato bassa variazione della misura Sauter significa diametro, che sono stati quantificati da deviazioni standard al di sotto del 15%, con l'indicazione che le dimensioni goccia sono state valutate in modo affidabile e preciso. Di conseguenza, il diametro medio Sauter misurata potrebbe venir utilizzato come criterio di confronto per valutare lo stress meccanico delle pompe indagate. Le pompe centrifughe MagLev rivelato diametri medi grandi misurati Sauter, indicando minori sollecitazioni meccaniche su gocce di emulsione rispetto alle pompe a membrana peristaltiche e 4 pistoncini. In Studi fino ad oggi, in linea di endoscopia ha dimostrato di essere una tecnica solida e semplice per goccia affidabile misura di formato 1,6,12-14,20-21, che è stata confermata anche da questo studio. Rispetto alle tecniche di misura alternative, come il sensore FBR fibra ottica, la FBRM e la tecnica 2D-ORM, la tecnica endoscopio può essere utilizzato come metodo standard per ottenere dati precisi in applicazioni liquido / liquido 12,14.
La maneggevolezza della endoscopia linea e la semplice produzione del sistema di emulsione olio-acqua non biologica permette una procedura semplice per rilevazioni formato goccia secondo il testo protocollo (vedi sopra). Tuttavia, va detto che la posizione della sonda dell'endoscopio dipende dal flusso del fluido nel serbatoio di stoccaggio. Ulteriori indagini (dati non riportati) hanno rivelato che l'obiettivo della sonda deve essere posizionato direttamente sotto il tubo di ingresso per portate inferiori fino al 5 L min -1al fine di evitare un rilevamento multiplo di una goccia 19. Per immagini nitide a portate oltre 5 L min -1, si consiglia di posizionare la sonda ad almeno 10 cm di distanza dal tubo di ingresso. Indipendente dei parametri di processo, il titolare della endoscopia linea deve essere stabile per evitare uno spostamento della sonda, che può produrre immagini sfocate.
Inoltre, si dovrebbe in particolare osservato che la dimensione della goccia rilevato è vicino al limite inferiore di rilevamento del sistema di foto-ottico applicata, in cui il diametro minimo goccia rilevabile è 6,5 micron. Poiché il software fornito dal produttore è stata migliorata, tecniche di endoscopia in linea in grado di rilevare in modo affidabile una dimensione minima goccia di 1 micron. Inoltre, l'elaborazione delle immagini verrà ulteriormente sviluppato per consentire il monitoraggio on-line di applicazioni industriali.
Mentre il presente studio ha analizzato portate relativamente basse fino a 3,4 L 60; min -1, gli studi futuri dovrebbero prendere in considerazione una gamma più ampia di condizioni di funzionamento. Primi indagini sono state effettuate a portate fino a 20 L min -1 (dati non mostrati). Tuttavia, una diluizione 1: 2 (c tensioattivo = 0,09 ml L -1, c = 0,64 ml olio L -1) del sistema di emulsione acqua-olio è indicato a portate oltre 10 L min -1 19, come un aumento rottura goccia causata da maggiori sollecitazioni meccaniche altrimenti influenzerebbe goccia individuazione e ridurre il numero di gocce rilevati. Le prove sono state effettuate con una diluizione 1: 2 e confrontati con i risultati di un sistema di emulsione olio-acqua non diluito. Per entrambi gli approcci, la Sauter significa diametri sono stati misurati in maniera affidabile (deviazione standard al di sotto del 5%). Pertanto, frazione di volume ridotto (diluizione 1: 2) non influenza la misura Sauter significa diametri, e quindi una rottura goccia-goccia era trascurabile.
nt "> Questi potenti approcci sperimentali fornire una buona base per il miglioramento della tecnica endoscopica nonché l'acquisizione delle immagini, riconoscimento e analizzatore risultato relativo software. Inoltre, l'idoneità della tecnica endoscopica di classificare tipi di pompa e serie secondo la loro meccanica lo stress è stato dimostrato con successo. I risultati ottenuti sono essenziali per lo sviluppo del progetto della pompa e l'ottimizzazione delle pompe per ridurre i danni delle cellule.The authors have nothing to disclose.
Gli autori desiderano ringraziare la Commissione per la tecnologia e l'innovazione (CTI, Svizzera) per il loro supporto finanziario (n 13.236,1 PFFLI-LS).
CCD camera | Allied Vision Technologies GmbH | GX2750 | Equipment for inline endoscopy |
C-Flex Biopharmaceutical Tubing | Saint-Gobain Performance Plastics | 374-375-4 | Tube Select a tubing length of about 45 cm before the pump. |
C-Flex Biopharmaceutical Tubing | Saint-Gobain Performance Plastics | 374-375-3 | Tube Select a tubing length of about 45 cm after the pump and clamp on the flow sensor to this tubing. |
CLAVE Connector | Victus | 011-C2000 | Sampling port |
Controller LPC-200.1-02 | Levitronix GmbH | 100-30030 | PuraLev 200MU controller |
Controller LPC-600.1-02 | Levitronix GmbH | 100-30033 | PuraLev 600MU controller |
LeviFlow Clamp-On Sensor LFSC-12 | Levitronix GmbH | 100-30329 | Flow sensor for flow rates below 5 L min-1 |
LeviFlow Converter LFC-1C-CS | Levitronix GmbH | 100-30328 | Flow sensor output device |
Masterflex I/P Easy Load | Fisher Scientific AG | EW-77963-10 | Peristaltic pump |
Mitos free flow valve | Parker Hannifin Europe Sàrl | FFLQR16S6S6AM | Valve |
Mobil Eal Arctic | Exxon Mobil Corporation | Mobil EAL Arctic 22 | Oil Prepare the emulsion directly before the experiment. |
Motor | Elektromotorenwerk Brienz AG | 7WAC72N4THTF | Motor for agitator shaft |
Motor BSM-1.4 | Levitronix GmbH | 100-10005 | PuraLev 200MU motor |
Motor LPM-600.4 | Levitronix GmbH | 100-10038 | PuraLev 600MU motor |
Norm-Ject 10 mL Luer Lock | Restek Corporation | 22775 | Syringe |
Pump Head LPP-200.5 | Levitronix GmbH | 100-90525 | PuraLev 200MU pump head |
Pump Head LPP-600.18 | Levitronix GmbH | 100-90548 | PuraLev 600MU pump head |
Quattroflow 1200-SU | Almatechnik AG | QF 1200 | 4-piston diaphragm pump |
SciPres Sensor | SciLog | 080-695PSX | Pressure sensor |
SciPres Sensor Monitor | SciLog | 080-690 | Pressure sensor output device |
SOPAT-VF Inline Endoscopic Probe | SOPAT GmbH | Inline endoscopy | |
Stroboscope | Drello GmbH & Co KG | Drelloscop 255-01 | Equipment for inline endoscopy |
Triton X-100 | Sigma-Aldrich | X100 | Surfactant Handle with gloves and goggles. (acute toxicity, eye irritation) |