Shear stress investigations on an oil-water emulsion system result in drop breakup over the experimental time. To count drop sizes in pumping processes, the suitability of inline endoscopy was successfully demonstrated in this protocol.
Las bombas se utilizan principalmente cuando se transfieren caldos de cultivo estériles en los procesos de producción biofarmacéuticas y biotecnológicas. Sin embargo, durante el proceso de bombeo fuerzas de corte se producen, que puede conducir a la pérdida de productos cualitativa y / o cuantitativa. Para calcular el esfuerzo mecánico con un gasto limitado experimental, se utilizó un sistema de emulsión de aceite-agua, cuya idoneidad se demostró para detecciones tamaño de gota en biorreactores 1. Como gota de ruptura del sistema de emulsión de aceite-agua es una función de la tensión mecánica, la caída de los tamaños necesitan ser contados en el tiempo experimental de las investigaciones de estrés de cizallamiento. En estudios anteriores, la endoscopia inline se ha demostrado ser una técnica de medición precisa y fiable para las detecciones de tamaño de gota en dispersiones líquido / líquido. El objetivo de este protocolo es demostrar la idoneidad de la técnica de endoscopia en línea para las mediciones de tamaño de gota en los procesos de bombeo. Con el fin de expresar el tamaño de la gota, el diámetro medio de Sauterd 32 se utilizó como el diámetro representante de gotas en la emulsión aceite-agua. Los resultados mostraron baja variación en los diámetros medios Sauter, que se cuantificaron por desviaciones estándar por debajo de 15%, lo que indica la fiabilidad de la técnica de medición.
Las bombas se utilizan para transferir los cultivos de células en las industrias farmacéuticas y biotecnológicas. Durante el proceso de bombeo, el estrés mecánico puede resultar en el daño celular irreversible, lo que podría poner en peligro la cantidad y la calidad del producto 1-4. El nivel de estrés mecánico depende de la configuración del tipo de bomba y la bomba, como se ha demostrado en estudios previos 5-6. Comúnmente, las bombas peristálticas, jeringas y el diafragma se utilizan para un solo uso de aplicaciones basadas en tecnología (SU). Estas bombas resultan en altas fuerzas de cizallamiento locales causadas por la compresión de la tubería de la bomba y el flujo pulsante 7.
Para superar estos inconvenientes, bombas centrífugas de levitación magnética (bombas centrífugas MagLev) constituyen una alternativa prometedora. El motor es accionado magnéticamente a fin de evitar huecos estrechos entre el impulsor y la carcasa de la bomba (Figura 1). Un estudio anterior investigó la centrífuga MagLevbombas y mostró la tensión mecánica menor en células de ovario de hámster chino (CHO) en comparación con las bombas de diafragma 5 peristáltica y 4 pistones. Además, los análisis de hemólisis no revelaron trauma sangre y trombo formación significativa sobre un rango de condiciones de operación utilizando estas bombas 8-11. Los resultados demuestran que el uso de estas bombas diseñadas específicamente se aplica menos estrés mecánico sobre los sistemas biológicos en comparación con las bombas peristálticas y el diafragma. Para investigar la tensión mecánica con un gasto limitado experimental, un sistema modelo de emulsión de aceite-agua se recomienda debido a su costo (aproximadamente 99,8%) y (ca. 99,5%) la aplicación de tiempo reducido en comparación con los sistemas de cultivo de células biológicas.
Como gota de ruptura del sistema de emulsión de aceite-agua es una función de la tensión mecánica, la caída de tamaños deben ser contados en el tiempo experimental de las investigaciones de estrés de cizallamiento. Muchas de las técnicas para el dimensionamiento gotas están disponibles, which se puede dividir en sonido, láser y técnicas de foto base 12. En particular, el uso de la sonda en línea endoscopia foto-óptico muestra tamaños de gota casi idénticos para las detecciones manuales y automáticas (desviación estándar por debajo de 10%) y permite una detección de 250 gotas por minuto 13. Debido a su exactitud y fiabilidad, la técnica endoscopio ha demostrado ser una técnica de medición estándar eficaz para distribuciones de tamaño de gota en dispersiones líquido / líquido cuando se compara con otras sondas comúnmente utilizados (por ejemplo, fibra óptica adelante-atrás-ratio (FBR) sensor , método de haz enfocado de reflectancia (FBRM) y la técnica de medición de reflectancia óptica de dos dimensiones (2D-ORM)) 12,14. Por otra parte, la adecuación de la endoscopia en línea para la medición de tamaños de gota en un recipiente agitado se ha demostrado varias veces en las investigaciones anteriores 15-18.
Basado en un estudio previo 6, este protocolo describeel uso de la endoscopia en línea para determinar tamaños de gota (diámetro medio Sauter) de un sistema de emulsión de aceite-agua en las bombas. El diámetro medio Sauter fue utilizado como un criterio de comparación con el fin de estimar el esfuerzo mecánico de los multi-uso (MU) bombas centrífugas MagLev, un peristáltica y un solo uso (SU) 4-pistón de la bomba de diafragma.
Figura 1. levitación magnética del sistema de bomba centrífuga. (A) El principio de un motor sin cojinetes y (B) la PuraLev 200mu se muestran como un ejemplo. Por favor, haga clic aquí para ver una versión más grande de esta figura.
El objetivo de este protocolo es demostrar la idoneidad de la técnica de endoscopia en línea para las mediciones de tamaño de gota en los procesos de bombeo. Para este propósito, la caída de tamaños de un sistema de emulsión de aceite-agua se determinaron y un diámetro medio Sauter medido se calculó para caracterizar la tensión mecánica de la centrífuga MagLev bombas, así como sus homólogos, un peristáltica y una bomba de diafragma 4-pistón. Los resultados mostraron baja variación de la medida medio Sauter diámetros, los cuales fueron cuantificados por desviaciones estándar por debajo de 15%, lo que indica que los tamaños de gota se han medido de forma fiable y precisa. Como consecuencia, el diámetro medio de Sauter medido con éxito podría ser utilizado como un criterio de comparación para evaluar la tensión mecánica de las bombas investigados. Las bombas centrífugas MagLev revelaron mayores medidos Sauter diámetros medios, indicando tensiones mecánicas más bajas en las gotas de emulsión en comparación con las bombas de diafragma peristálticos y 4 pistones. En StudIES hasta la fecha, la endoscopia inline se ha demostrado ser una técnica robusta y simple para la medición del tamaño de gota fiable 1,6,12-14,20-21, que también fue confirmado por este estudio. En comparación con las técnicas de medición alternativos, tales como el sensor de FBR de fibra óptica, la FBRM y la técnica 2D-ORM, la técnica endoscopio se pueden utilizar como el método estándar para la obtención de datos precisos en aplicaciones de líquido / líquido 12,14.
El fácil manejo de la endoscopia en línea y de la simple producción del sistema de emulsión de aceite-agua no biológica permite un procedimiento claro para detecciones tamaño de gota de acuerdo con el texto del protocolo (véase más arriba). Sin embargo, se debe mencionar que la posición de la sonda endoscopio depende del flujo de fluido en el recipiente de almacenamiento. Otras investigaciones (datos no mostrados) han revelado que la lente de la sonda debe estar situado directamente debajo del tubo de entrada para caudales más bajos hasta 5 L min -1a fin de evitar una detección múltiple de una gota 19. Para imágenes nítidas a velocidades de flujo más de 5 L min -1, se recomienda colocar la sonda al menos 10 cm del tubo de entrada. Independiente de los parámetros del proceso, el titular de la endoscopia en línea debe ser estable a fin de evitar un desplazamiento de la sonda, lo que puede dar lugar a imágenes borrosas.
Además, particularmente Cabe señalar que el tamaño de la gota detectada es cercana al límite inferior de detección del sistema de foto-óptico aplicada, donde el diámetro mínimo gota detectable es 6,5 m. A medida que el software proporcionado por el fabricante se ha mejorado, las técnicas de endoscopia en línea pueden detectar de manera fiable un tamaño de gota mínima de 1 m. Por otra parte, el tratamiento de la imagen se seguirá desarrollando para permitir el monitoreo en línea de aplicaciones industriales.
Aunque el presente estudio se centró en relativamente bajas tasas de flujo de hasta 3,4 L 60; min -1, los estudios futuros deben considerar una amplia gama de condiciones de operación. Las primeras investigaciones se han llevado a cabo a velocidades de flujo de hasta 20 L min -1 (datos no mostrados). Sin embargo, una dilución 1: 2 (c surfactante = 0,09 ml L-1, c = 0,64 ml de aceite L -1) del sistema de emulsión de aceite-agua se recomienda a caudales de más de 10 L min -1 19, como una mayor ruptura gota causado por el aumento de la tensión mecánica de lo contrario afectará caer la detección y reducir el número de gotas detectadas. Las pruebas se llevaron a cabo con una dilución 1: 2 y se comparan con los resultados de un sistema de emulsión de aceite-agua sin diluir. Para ambos enfoques, el medio Sauter diámetros han sido medidos con fiabilidad (desviación estándar por debajo de 5%). Por lo tanto, la fracción de volumen reducido (dilución 1: 2) no influyó en la medida medio Sauter diámetros, y por lo tanto una ruptura gota-gota era insignificante.
nt "> Estos potentes enfoques experimentales proporcionan una buena base para la mejora de la técnica de endoscopia, así como el software de adquisición de imágenes, el reconocimiento y el resultado analizador relacionada. Además, la idoneidad de la técnica de endoscopia para clasificar tipos de bombas y series de acuerdo a su mecánico estrés fue demostrado con éxito. Los resultados obtenidos son esenciales para el desarrollo del diseño de la bomba y la optimización de bombas para reducir el daño celular.The authors have nothing to disclose.
Los autores desean agradecer a la Comisión de Tecnología e Innovación (CTI, Suiza) por su apoyo financiero (núm 13.236,1 PFFLI-LS).
CCD camera | Allied Vision Technologies GmbH | GX2750 | Equipment for inline endoscopy |
C-Flex Biopharmaceutical Tubing | Saint-Gobain Performance Plastics | 374-375-4 | Tube Select a tubing length of about 45 cm before the pump. |
C-Flex Biopharmaceutical Tubing | Saint-Gobain Performance Plastics | 374-375-3 | Tube Select a tubing length of about 45 cm after the pump and clamp on the flow sensor to this tubing. |
CLAVE Connector | Victus | 011-C2000 | Sampling port |
Controller LPC-200.1-02 | Levitronix GmbH | 100-30030 | PuraLev 200MU controller |
Controller LPC-600.1-02 | Levitronix GmbH | 100-30033 | PuraLev 600MU controller |
LeviFlow Clamp-On Sensor LFSC-12 | Levitronix GmbH | 100-30329 | Flow sensor for flow rates below 5 L min-1 |
LeviFlow Converter LFC-1C-CS | Levitronix GmbH | 100-30328 | Flow sensor output device |
Masterflex I/P Easy Load | Fisher Scientific AG | EW-77963-10 | Peristaltic pump |
Mitos free flow valve | Parker Hannifin Europe Sàrl | FFLQR16S6S6AM | Valve |
Mobil Eal Arctic | Exxon Mobil Corporation | Mobil EAL Arctic 22 | Oil Prepare the emulsion directly before the experiment. |
Motor | Elektromotorenwerk Brienz AG | 7WAC72N4THTF | Motor for agitator shaft |
Motor BSM-1.4 | Levitronix GmbH | 100-10005 | PuraLev 200MU motor |
Motor LPM-600.4 | Levitronix GmbH | 100-10038 | PuraLev 600MU motor |
Norm-Ject 10 mL Luer Lock | Restek Corporation | 22775 | Syringe |
Pump Head LPP-200.5 | Levitronix GmbH | 100-90525 | PuraLev 200MU pump head |
Pump Head LPP-600.18 | Levitronix GmbH | 100-90548 | PuraLev 600MU pump head |
Quattroflow 1200-SU | Almatechnik AG | QF 1200 | 4-piston diaphragm pump |
SciPres Sensor | SciLog | 080-695PSX | Pressure sensor |
SciPres Sensor Monitor | SciLog | 080-690 | Pressure sensor output device |
SOPAT-VF Inline Endoscopic Probe | SOPAT GmbH | Inline endoscopy | |
Stroboscope | Drello GmbH & Co KG | Drelloscop 255-01 | Equipment for inline endoscopy |
Triton X-100 | Sigma-Aldrich | X100 | Surfactant Handle with gloves and goggles. (acute toxicity, eye irritation) |