从人类骨骼肌成肌原细胞和成纤维细胞的分离和定量免疫细胞化学表征

骨骼肌的修复和再生，需要卫星细胞^1，肌原干细胞^2,3。的作用在体内位于每肌纤维的肌膜和基底层之间的可逆静止状态存在这些细胞中，但被活化增殖，保险丝和区分肌肉组织被破坏，修复和再生^3。卫星细胞可以使用酶消化⁴年轻人和老年人人体肌肉活检标本及其生肌性能隔离随后可以在研究原代培养^5。这种隔离方法的关于细胞群体的产量和纯度的效率取决于所使用的方法，可从样品变化进行采样。从酶消化得到的两个主要贴壁细胞类型的卫星细胞（现称为肌细胞或肌肉前体细胞），初步确定为CD56 ⁺ /结蛋白细胞，万亩SCLE衍生的成纤维细胞，鉴定为CD56 ^–和TE7 ⁺细胞^5。的成纤维细胞具有快速的增殖速率和不发生不可逆的生长停滞和终末分化时像肌原细胞的细胞 – 细胞接触;因此，在混合人群，成纤维细胞可能溢出肌细胞主导文化。

成纤维细胞经常被视为刺激肌肉生物学家，然而，现在有在成纤维细胞作为值得研究的在他们自己的权利的越来越大的兴趣，特别是因为它们已被证明在肌肉修复⁶有一个与肌细胞协同作用。从人的肌肉的不同类型的细胞的分离和纯化由此试图调查中培养两种细胞类型的先天行为时一个重要的考虑因素的方法。荧光激活细胞分选（FACS）是一种方法，通过它的细胞可以被分类为进一步研究和/或计数并分析。 FACS已表明可靠丰富人类肌细胞，但细胞的产量进行后续培养迄今尚未高^7。定的体细胞，例如与衰老⁴相关的卫星细胞来源的肌细胞和非常差的增殖和分化的有限复制潜力，更温和的方法是必需的。单肌纤维的文化提供了一个不太积极的，是指获得鼠卫星细胞在他们sublaminal利基及其文化^8,9激活后仍驻留的。然而，这常常是不可能的，从人的肌肉活检材料（因为纤维很少能由肌腱到肌腱获得），这意味着，这种技术可能无法访问到兴趣研究人类肌源性细胞许多研究实验室。另外，单纤维的技术仅提供了非常有限的细胞数。

在这里，我们将介绍基于发电机排序系统利用胶原酶细胞TLE酶消化和分散酶，随后通过两个连续的轮磁激活细胞分选（MACS），它不仅提供了高纯度（> 95％生肌细胞）和产率（〜2.8×10 ^{6±8.87×10 5}个细胞/ g组织），用于在培养实验。 CD56被认为是金标准表面标记为人类卫星细胞的原位 ¹⁰和体外 ¹¹的识别和提供用于珠附着了理想表面标记候选。在此方法中CD56抗体缀合的氧化铁和超顺磁珠含有多糖类的通过一个高梯度磁性细胞分离柱放置在强磁场^12,13结合到细胞和通过。分离柱充满从而起到集中磁力线走向其表面产生强磁场梯度（〜4tesla）铁磁性钢丝绒或铁球矩阵¹⁴。在这些列中，即使稍微磁性的细胞被吸引和吸附到其表面^14。未结合（CD56 ^{– ）}细胞通过柱子而CD56 ⁺细胞标记与磁微珠被保留，直到去除来自磁场^12,15。

从分类处理的任何阶段的细胞悬浮液可以在进一步的实验所需的密度进行电镀。以下给定的介入​​的细胞成分可使用免疫细胞化学来鉴定，成像用宽视场或共聚焦荧光显微镜和分析定量使用图像分析方法，它允许在任何给定的图像中的所有标记细胞的快速客观测量。在我们的实验室，我们已经用这种双重免疫排序方式依次通过图像分析¹⁶表明CD56 ^–人成纤维细胞转分化容易进入脂肪细胞，而细胞肌卫星产地s为这种脂肪细胞转化⁵高度耐药。