Batrachochytrium dendrobatidis Infektion bei Amphibien können mit einer reduzierten Konzentration (0,0025%) und kürzere Laufzeit (5 Minuten Bäder für sechs Tage) von Itraconazol als allgemein verwendet, beseitigt werden. Weniger Sterblichkeit und weniger negative Nebenwirkungen wurden unter Verwendung dieser modifizierten Behandlungsprotokoll beobachtet.
Amphibien sind die mit den größten Rückgang aller Wirbeltierklasse und eine führende Ursache für diesen Rückgang ist eine Pilzerreger, Batrachochytrium dendrobatidis (Bd), die die Krankheit verursacht chytridiomycosis. Captive Sicherung Kolonien sind wichtig, weltweit für bedrohte Amphibienarten und möglicherweise die einzige Lebensader für die in kritischen vom Aussterben bedroht sein. Die Aufrechterhaltung Krankheit frei Kolonien ist eine Priorität der Gefangenschaft Manager, noch sichere und wirksame Behandlungen für alle Arten und über Lebensphasen nicht identifiziert worden. Die am häufigsten verwendeten chemotherapeutischen Behandlung ist Itraconazol, obwohl die Dosierung üblicherweise verwendeten schädlich für einige Individuen und Arten sein. Wir führten eine Behandlung klinische Studie zu beurteilen, ob eine untere und sicherer, aber effektive Dosis von Itraconazol gefunden werden konnte Bd-Infektionen zu heilen. Wir fanden, dass durch die Reduzierung der Behandlungskonzentration von 0,01 bis 0,0025%, und die Verringerung der Behandlungsdauer von 11-6 Tage von 5 min Bäder, könnten Frösche von Bd-Infektion mit weniger Nebenwirkungen und weniger therapieassoziierte Mortalität geheilt werden.
Amphibien erleben derzeit den größten Rückgang der biologischen Vielfalt aller Wirbeltier-Taxa ein. Chytridiomykose, eine Hautkrankheit, die durch den chytrid Pilzpathogen Batrachochytrium dendrobatidis (Bd) verursacht wird, ist eine der Hauptursachen für diesen dramatischen Rückgang Bd 2 ist der schlimmste Erreger auf Rekord für verursachen Verlust der biologischen Vielfalt:. Infiziert es über 600 Arten von Amphibien und hat verursachten Rückgänge in über 300 Arten, von denen mehr als 200 Arten sind vom Aussterben bedrohte oder ausgestorbene 2,3. Die Amphibien-Chytridpilz nicht wirtsspezifisch und es ist unklar, welche Eigenschaften des Host ermöglichen Bd-Infektion, um die Fortschritte zu schweren Krankheit. Chytridiomykose Tod verursacht durch Störung Ionenkanäle in der Haut, was zu Elektrolytverlust und Herzversagen 4. Auch Bd Überstand (enthaltend keine Bd Zoosporen) eine Immunantwort bei Kaulquappen 5-Zuführungsg Forscher glauben, Bd erzeugt eine giftige Nebenprodukt 6.
Da viele Arten sind stark rückläufig, in Gefangenschaft Sicherung Kolonien und Zuchtprogramme sind wichtige Schutzmaßnahmen, und die einzige Lebensader für einige Arten sein. Aufbau und Pflege frei von Krankheiten Kolonien ist eine Herausforderung für Amphibien-Management-Einrichtungen. Die aktuellen chemotherapeutischen Methoden zur Behandlung von Bd-Infektionen, obwohl effektiv ist, kann für die Tiere, die behandelt werden, und keine einzige Behandlungsmethode erfolgreich über Arten und Altersklassen von Amphibien 7 gewesen.
Nur wenige klinische Studien von Behandlungen für Bd-Infektion durchgeführt worden sind 7. Die drei am häufigsten verwendeten Methoden der Behandlung sind Wärmetherapie, Chloramphenicol und Itraconazol. Wärmetherapie ist eine Behandlungsoption, die nonchemotherapeutic haben wenige Nebenwirkungen können auf mehrere Lebensphasen verwendet werden wird, und ist GenerVerbündeter wirksam. In einer Therapiestudie, Chatfield und Richards-Zawacki 8 festgestellt, dass 96% der behandelten Tiere waren Infektionen, nachdem sie bei 30 ° C für 10 Tage untergebracht gelöscht. Obwohl dieser Versuch war nicht 100% erfolgreich, bietet es eine Grundlinie für andere Wärmetherapie für die eigene Spezies zu beurteilen. Wärmetherapie, obwohl effektiv für viele Arten ist unpraktisch für viele alpine Arten, die nicht bei hohen Temperaturen für eine längere Zeit verbleiben kann. Chloramphenicol, ein antibakterielles, wurde erfolgreich verwendet, um Bd in vielen Arten zu behandeln, und hemmt das Pilzwachstum in vitro. Als antibakterielles, die Chloramphenicol nicht den Pilz befallen besonders aber ist bekannt, dass die Apoptose in eukaryotischen Zellen 9 zu bewirken. Es wurde spekuliert, daß Chloramphenicol-Therapie verursacht Apoptose in der Haut, die intrazelluläre Abtöten Sporangien, obwohl der genaue Wirkmechanismus ist unbekannt. Obwohl keine klinischen Studien durchgeführt worden, und deshalbDosis und Behandlungszeit wurden nicht bewertet, aktuelle Behandlungsprotokolle erfordern in der Regel Untertauchen für zwei bis vier Wochen 10,11, so dass diese Behandlung unpraktisch für terrestrischen Amphibien. Chloramphenicol wurde auch in einigen Ländern für den tierärztlichen Gebrauch beschränkt worden, weil die Exposition des Menschen mit einer seltenen Form von aplastischer Anämie 12 in Verbindung gebracht.
Itraconazol, ein Azol-Antimykotika, ist das am häufigsten für die Behandlung der Bd-Infektion bei Amphibien in Gefangenschaft eingesetzt. Das am häufigsten verwendete Protokoll ist Bade Tieren in einer 0,01% igen Lösung von Itraconazol fünf Minuten pro Tag für 11 aufeinanderfolgende Tage. Dieses Protokoll wurde von Standards für Säugetier Verabreichung verwendet abgeleitet, und während effektiv für Amphibien, ist es nicht auf klinische Studien in Amphibien 11,13 berechnet. Dieses Protokoll kann negative Nebenwirkungen bei bestimmten Arten verursachen, besonders in der Gattung Rana und Kaulquappen und in den letzten 11 Metamorphe.Tadpole Behandlung erfolgreich war mit einer viel niedrigeren Konzentration (0,0005%) von Itraconazol, wurde aber mit Depigmentierung 14 zugeordnet. Die gleiche Konzentration wurde auf den letzten Metamorphe erprobt und festgestellt, die auf die Behandlung erfolglos Infektion 15 zu sein. Denn es besteht die Gefahr von negativen Nebenwirkungen der Behandlung mit Itraconazol, haben einige Praktiker die Hälfte der üblichen Konzentration (0,005%) für 11 aufeinanderfolgende Tage verwendet und fanden, dass bei der Heilung von Infektionen Bd 16 erfolgreich.
Die vorliegende Studie ist eine Zusammenfassung einer klinischen Studie mit Itraconazol-Behandlung zu Bd-Infektion 15 zu behandeln. Das Protokoll beschreibt einen Versuch, die niedrigste Dosis und Behandlungszeit, die sowohl sicher und wirksam für die Behandlung von infizierten Tieren mit Bd Itraconazol finden. Tiere in dieser Studie verwendet wurden, waren letzten Metamorphe der Golfküste Kröten, Incilius nebulifer.
Über dieses Protokoll konnten wir sicher und effektiv reduzieren die Behandlungsdosis und Zeit von Itraconazol-Behandlung für Bd bei Amphibien. Die niedrigste Behandlungsdosis und Zeit (0,0025% für sechs Tage) war eine erfolgreiche Behandlung für subklinisch infiziert I. nebulifer. Die Wirksamkeit von sowohl einer niedrigeren Dosis und Behandlungsdauer zeigen die Notwendigkeit für klinische Therapiestudien für Bd-Infektion Behandlungen, da gibt es noch keine sichere und wirksame Behandlu…
The authors have nothing to disclose.
Ich möchte CL-Richards Zawacki für Hilfe danken Konzeption der Versuchsplanung und die Unterstützung mit Materialien, A. Pessier Hilfe Festlegung eines Behandlungsschema und die Sektionsanalysen, MWH Chatfield, MJ Robak, K. und D. Tasker Lenger für die Hilfe in der Labor-und Support und McFadden M. und P. Harlow am Taronga Zoo für die Nutzung ihrer Speicher während der Dreharbeiten. Das Projekt wurde teilweise durch Louisiana Department of Wildlife and Fisheries durch die Louisiana Environmental Education Zuschuss der Kommission nach LA Brannelly ausgezeichnet und von Life Technologies finanziert.
0.1% Aqueous Itraconazole, Sporonox | Janssen Pharmaceutica Inc. | |
NaCl | Fisher Scientific | S640-500 |
KCl | Fisher Scientific | BP366-1 |
CaCl2 | Fisher Scientific | BP510-100 |
NaHCO3 | Fisher Scientific | BP328-500 |
Sterile cotton swabs | Medical and Wire Equipment | MW113 |
1.5 ml micro tubes | Sarstedt | 73.703.217 |
Qiagen DNEasy Blood and Tissue Kit | Qiagen | 69581 |
7500 Real-time PCR | Applied Biosystems | 4351104 |
VIC IPC | Applied Biosystems | 4308323 |
BSA | Applied Biosystems | AM2618 |
Agar | Invitrogen | 30391023 |
Tryptone | Invitrogen | Q10029 |
Penicillin-streptomycin | Invitrogen | 15070-063 |
Petri Dish | Sigma Aldrich | CLS430589 |