Yenidoğan subventricular Bölge Elektroporasyon
Summary
Biz yenidoğan subventricular dilimi elektroporasyon olarak adlandırılan minimal invaziv tekniği göstermek. Tekniği yenidoğan yavruların lateral ventriküllerin içine plazmid DNA enjekte ve sunmak için elektrik akımı uygulayarak oluşur ve genetik nöral kök hücreleri manipüle
Abstract
Nöral kök hücreler (NSC'lerde) hattı postnatal lateral ventriküllerin ve nöronlar, astrositler ve ependimal hücreleri 1 dahil olduğu birden fazla hücre tipleri yol açmaktadır. Moleküler MGK kendini yenileme, bağlılık sorumlu yollar ve farklılaşma anlama sokmak beyin onarım ve iyi merkezi sinir sistemi bozuklukları anlamak için eşsiz potansiyeli açısından son derece önemlidir. Memeli sistemlerin manipülasyon için Önceki yöntemler tüm hayvan 2 düzeyinde genetik mühendisliğinin zaman alıcı ve pahalı bir çaba gereklidir. Böylece, çalışmaların büyük çoğunluğu in vitro ya da omurgasız NSC moleküllerin fonksiyonlarının inceledik.
Burada, neonatal subventrikuler alanin (SVZ) elektroporasyon olarak ifade edilir neonatal NPC işlemek için basit ve hızlı bir teknik göstermektedir. Benzer teknikler embriyonik NSC'lerde çalışmak için bir on yıl önce geliştirilen ve cortica çalışmalar yardım etmişl geliştirme 3,4. Daha yakın zamanda bu postnatal kemirgen ön beyin 5-7 incelemek için kullanılmıştır. Bu teknik SVZ NSC'lerde ve yavrularının sağlam etiketleme sonuçlar. Böylece, postnatal SVZ elektroporasyon memeli MGK genetik mühendisliği için bir maliyet ve zaman etkin bir alternatif sunuyor.
Protocol
Representative Results
Discussion
Burada ayrıntılı yenidoğan SVZ elektroporasyon tekniği, hızlı ve güçlü bir etiket ve SVZ kök hücre ve yavrularının işlemek için bir tekniktir. Elektroporasyon için diğer teknikler ile karşılaştırıldığında, sahip olduğu birkaç avantajı vardır. İlk olarak, hücrelerin odak etiketleme göz önüne alındığında, tek hücre ve otonom olmayan hücre otonom etkilerini ayırt edebilir. Indüklenebilir sistemleri kullanarak İkincisi, genetik manipülasyon birini önce veya sinaptik entegrasyon …
Disclosures
The authors have nothing to disclose.
Acknowledgements
Bu çalışma Savunma Bakanlığı (Fikir geliştirme ödülü, W81XWH-10-1-0041, AB), CT Kök hücre hibe (AB) ve Sağlık NRSA 10.668.225 (DMF) Ulusal Enstitüsü bağışları ile desteklenmiştir. Mevcut malzeme kısmen Connecticut Kök Hücre Araştırma Hibeler Programı kapsamında Connecticut Eyaleti tarafından desteklenen çalışmaya dayanır. İçeriğinde sadece yazarların sorumluluğundadır ve mutlaka Connecticut, Connecticut veya CT Yeniliklerin Devlet Halk Sağlığı Bölümü Devletin resmi görüşlerini temsil etmemektedir, Inc fon, veri toplama çalışması tasarım herhangi bir rolü vardı ve analiz, yayınlamak kararı veya yazının hazırlanması.
Materials
| Name of the reagent | Company | Catalogue number | Comments (optional) |
| Heavy Polished Borosilicate Tubing | Sutter Instrument | BF150-110-10 | |
| Dual-Stage Glass Micropipette Puller | Narishige | PC-10H | |
| Fast Green | Fischer Scientific | 0521192205 | |
| ECM 830 Square Wave Pulse generator | Harvard Apparatus | 45-0052 | |
| Tweezertrodes | Harvard Apparatus | 45-0488 | |
| Fiber-Optic Light Source | Fisher Scientific | 12-562-36 | |
| Tungsten Halogen lamp | USHIO America, Inc | 1002247 | |
| Picospritzer II | Parker Instruments | 052-0312-900 |
References
- Kriegstein, A., Alvarez-Buylla, A. The glial nature of embryonic and adult neural stem cells. Annual Review of Neuroscience. 32, 149-184 (2009).
- Imayoshi, I., Sakamoto, M., Kageyama, R. Genetic methods to identify and manipulate newly born neurons in the adult brain. Frontiers in Neuroscience. 5, 64 (2011).
- LoTurco, J., Manent, J. B., Sidiqi, F. New and improved tools for in utero electroporation studies of developing cerebral cortex. Cereb Cortex. 19, i120-i125 (2009).
- Tabata, H., Nakajima, K. Efficient in utero gene transfer system to the developing mouse brain using electroporation: visualization of neuronal migration in the developing cortex. Neuroscience. 103, 865-872 (2001).
- Boutin, C., Diestel, S., Desoeuvre, A., Tiveron, M. C., Cremer, H. Efficient in vivo electroporation of the postnatal rodent forebrain. PloS ONE. 3, e1883 (2008).
- Chesler, A. T., et al. Selective gene expression by postnatal electroporation during olfactory interneuron nurogenesis. PloS ONE. 3, e1517 (2008).
- Platel, J. C., et al. NMDA receptors activated by subventricular zone astrocytic glutamate are critical for neuroblast survival prior to entering a synaptic network. Neuron. 65, 859-872 (2010).
- Alvarez-Buylla, A., Kohwi, M., Nguyen, T. M., Merkle, F. T. The heterogeneity of adult neural stem cells and the emerging complexity of their niche. Cold Spring Harbor Symposia on Quantitative Biology. 73, 357-365 (2008).
- Fernandez, M. E., Croce, S., Boutin, C., Cremer, H., Raineteau, O. Targeted electroporation of defined lateral ventricular walls: a novel and rapid method to study fate specification during postnatal forebrain neurogenesis. Neural Development. 6, 13 (2011).
- de Chevigny, A., et al. miR-7a regulation of Pax6 controls spatial origin of forebrain dopaminergic neurons. Nature Neuroscience. 15, 1120-1126 (2012).
- Lacar, B., Young, S. Z., Platel, J. C., Bordey, A. Imaging and recording subventricular zone progenitor cells in live tissue of postnatal mice. Frontiers in Neuroscience. 4, (2010).
- Feliciano, D. M., Quon, J. L., Su, T., Taylor, M. M., Bordey, A. Postnatal neurogenesis generates heterotopias, olfactory micronodules and cortical infiltration following single-cell Tsc1 deletion. Human Molecular Genetics. 21, 799-810 (2012).
- Iguchi, T., Yagi, H., Wang, C. C., Sato, M. A tightly controlled conditional knockdown system using the Tol2 transposon-mediated technique. PloS ONE. 7, e33380 (2012).
