Néonatale électroporation zone sous-ventriculaire
Summary
Nous démontrons une technique peu invasive appelée électroporation zone sous-ventriculaire néonatal. La technique consiste à injecter de l'ADN plasmidique dans les ventricules latéraux de chiots nouveau-nés et application d'un courant électrique à fournir et manipuler génétiquement des cellules souches neurales
Abstract
Les cellules souches neurales (NSC) en ligne les ventricules latéraux et postnatales donner lieu à plusieurs types de cellules qui comprennent les neurones, les astrocytes et les cellules épendymaires 1. Comprendre les mécanismes moléculaires responsables de la NSC auto-renouvellement, l'engagement et la différenciation est essentielle pour exploiter leur potentiel unique pour réparer le cerveau et de mieux comprendre les troubles du système nerveux. Les méthodes précédentes pour la manipulation des systèmes de mammifères nécessaire l'effort long et coûteux du génie génétique au niveau de l'animal entier 2. Ainsi, la grande majorité des études ont exploré les fonctions des molécules NSC in vitro ou chez les invertébrés.
Ici, nous démontrons la technique simple et rapide à manipuler PNJ néonatales qui est désigné comme zone sous-ventriculaire néonatal (SVZ) électroporation. Des techniques similaires ont été mis au point il ya une décennie à étudier NSCs embryonnaires et ont aidé des études sur cortical le développement 3,4. Plus récemment, elle a été appliquée pour étudier le cerveau antérieur des rongeurs postnatale 5-7. Cette technique conduit à l'étiquetage robuste de SVZ NSC et de leur progéniture. Ainsi, après la naissance SVZ électroporation offre un coût de remplacement et du temps efficace pour NSC ingénierie génétique chez les mammifères.
Protocol
Representative Results
Discussion
Ici, nous détaillons la technique de la SVZ électroporation néonatale, une technique permettant de rapidement et vigoureusement étiqueter et de manipuler les cellules souches SVZ et de leur progéniture. Il ya plusieurs avantages que l'électroporation a par rapport à d'autres techniques. Premièrement, étant donné l'étiquetage focale des cellules, on est capable de discerner des cellules autonomes et non-autonomes cellule effets. Deuxièmement, la manipulation génétique en utilisant des systèmes …
Disclosures
The authors have nothing to disclose.
Acknowledgements
Ce travail a été soutenu par des subventions du ministère de la Défense (prix de développement d'idées, W81XWH-10-1-0041, AB), CT cellules souches subvention (AB), et un Institut national de la santé NRSA 10668225 (DMF). Le matériel actuel est basé sur le travail soutenu en partie par l'État du Connecticut Connecticut sous la tige subventions Cellulaire Programme de recherche. Son contenu relève de la seule responsabilité des auteurs et ne reflètent pas nécessairement les vues officielles de l'État du Connecticut, le ministère de la Santé publique de l'État du Connecticut ou CT Innovations, Inc Les bailleurs de fonds n'ont joué aucun rôle dans la conception de l'étude, la collecte de données et l'analyse, la décision de publier, ou de la préparation du manuscrit.
Materials
| Name of the reagent | Company | Catalogue number | Comments (optional) |
| Heavy Polished Borosilicate Tubing | Sutter Instrument | BF150-110-10 | |
| Dual-Stage Glass Micropipette Puller | Narishige | PC-10H | |
| Fast Green | Fischer Scientific | 0521192205 | |
| ECM 830 Square Wave Pulse generator | Harvard Apparatus | 45-0052 | |
| Tweezertrodes | Harvard Apparatus | 45-0488 | |
| Fiber-Optic Light Source | Fisher Scientific | 12-562-36 | |
| Tungsten Halogen lamp | USHIO America, Inc | 1002247 | |
| Picospritzer II | Parker Instruments | 052-0312-900 |
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