Summary

항원은 컴팩트 Hyperbranched Polyglycerols 중 이식 막으로 기능 적혈구를 보호

Published: January 02, 2013
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Summary

hyperbranched polyglycerol (HPG)와 적혈구의 세포막 수정 (적혈구)가 제공됩니다. 수정 적혈구는 수성 2 상 분할, 삼투 취약성과 보완 매개 용해에 의해 특징되었습니다. 표면 단백질과 항원의 위장은 유동 세포 계측법 및 마이크로 타이핑 시스템 (MTS) 혈액 phenotyping 카드를 사용 평가되었습니다.

Abstract

적혈구 (RBC) 수혈은 thalassemia 전공 및 낫 세포 빈혈 1-3으로 급성과 만성 의료 문제의 숫자의 치료를 위해 중요합니다. RBC 표면 (~ 308 항원 4) 만성 수혈 요법에 환자 transfused 적혈구 4, 5에 약간의 항원의 양을 일치로 인해 alloantibodies을 개발에 대한 항원의 다양한의 존재로 인해. 이러한 폴리에틸렌 글리콜 (PEG)와 hyperbranched polyglycerol (HPG)와 같은 친수성 고분자로 이식하는 등 산소, 포도당 및 이온 세와 같은 작은 분자의 흐름에 영향을주지 않고 표면 항원과 항체의 상호 작용을 방지 RBC 막에 제외 층을 형성한다. 현재 어떤 방법 때문에 적혈구 표면 및 D에 대한 항원 큰 수 (기반 단백질과 탄수화물)의 존재에 의해 제시 발굴 과제의 일환으로 보편적 적혈구 기증자 세포의 생성에 사용할 수 없습니다이러한 방법 evelopment이 크게 수혈의 안전을 향상시키고, 극적 적혈구의 가용성 및 사용을 향상시킬 수 있습니다. 이 보고서에서 HPG 및 특성의 접목 막에 의해 항원 보호 기능 적혈구를 개발하는 데 사용되는 실험이 제공됩니다. HPGs은 매우 컴팩트 한 폴리머 6, 7 biocompatible되며, 지질 막 8, 9 및 마스크 적혈구 표면 항원 10, 11을 둘러싸는 세포 glycocalyx 내에 위치 될 것으로 예상된다.

Protocol

A. Hyperbranched Polyglycerol의 변경 (SS-HPG) 장소 둥근 바닥 플라스크에 60 kDa (0.5 g, 0.0083 mmol)을 HPG 동결 건조 및 90 진공 박을 건조 ° C. 실내 온도에 휴대용 술병을 냉장하고, 무수 피리딘 (3 ML)에서 건조 HPG를 해산. 카르 복실 그룹과 HPG에 약 여덟 수산기 그룹을 functionalize하려면 HPG 솔루션으로 dimethylaminopyridine의 촉매 금액 (피리딘 5 MG / ML 솔루션의 한 방울)을 추가합니다. 이 혼합?…

Representative Results

리 서스 D 항원과 CD47 RBC 표면 단백질의 위장복은 형광 표시 단클론 항체를 사용하여 유동 세포 계측법에 의해 정량화했고, 대표 결과는 그림 1에 있습니다. HPG – 이식 적혈구의 경우 (회색), 신호의 강도는 표면 단백질의 마스킹을 나타내는 세포 표면에 항체에 바인딩의 감소를 나타내는 컨트롤 적혈구 (적색 및 녹색)에 비해 (왼쪽으로 이동 피크) 감소 . <p class="jove_content" fo:keep-togeth…

Discussion

유니버설 기증 적혈구는 수혈 치료를위한 강화 혈액 가용성 및 안전에 큰 잠재력을 지니고 있습니다. 적혈구는 오랜 순환 고유 biocompatibility 14, 15로 인해 유망 약물 투여 차량을 간주됩니다. 본 논문에서 제시 실험이 수정 적혈구를 HPG의 체외 특성에를 평가합니다. 체외의 속성과 HPG 수정 적혈구의 생체 유통은 최근 8, 11의 그룹에 조사되었습니다. NaCl과 인산 ?…

Disclosures

The authors have nothing to disclose.

Acknowledgements

이 연구는 캐나다 혈액 서비스 (CBS)과 보건 과학 (CIHR) 연구 파트너십 기금의 캐나다 연구소에 의해 자금을 지원했다. 저자는 자신의 연구 시설의 사용에 대한 혈액 연구 UBC 센터에서 LMB Macromolecule 허브 감사드립니다. 인프라 시설 혁신에 대한 캐나다 재단 (CFI)과 건강 연구에 대한 마이클 스미스 재단 (MSFHR)에 의해 지원됩니다. R. Chapanian은 (CIHR / CBS) 박사 수혈 과학 장학금 및 MSFHR 연구 연수 후 박사 교제의 수신자의 수상자이다. JN Kizhakkedathu는 MSFHR 경력 탐정 학술 상 수상자이다.

Materials

Glycidol Sigma Aldrich (ON, Canada)
Trimethylolpropane Fluka (ON, Canada)
Potassium methylate Sigma Aldrich (ON, Canada)
Anhydrous pyridine Sigma Aldrich (ON, Canada)
4-Dimethylaminopyridine Sigma Aldrich (ON, Canada)
Succinic anhydride Sigma Aldrich (ON, Canada)
Acetone Fisher Scientific (ON, Canada)
Anhydrous dimethyl formamide Sigma Aldrich (ON, Canada)
N-Hydroxysuccinimide Sigma Aldrich (ON, Canada)
N,N’-Diisopropylcarbodiimide Sigma Aldrich (ON, Canada)
MTS cards Micro Typing System (MTS) cards (FL, USA)
Dextran 500 kDa Pharmacia Fine Chemicals (Sweden)
PEG 8 kDa Sigma Aldrich (ON, Canada)
FITC monoclonal anti-Rhesus D (RhD) Quotient Biodiagnostics (PA, USA)
PE monoclonal anti-CD47 BD Biosciences (NJ, USA)
Drabkin’s reagent Sigma Aldrich (ON, Canada)
Table. Chemicals and reagents used for the grafting of HPG polymers to RBC membrane and their analysis.

References

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Chapanian, R., Constantinescu, I., Brooks, D. E., Scott, M. D., Kizhakkedathu, J. Antigens Protected Functional Red Blood Cells By The Membrane Grafting Of Compact Hyperbranched Polyglycerols. J. Vis. Exp. (71), e50075, doi:10.3791/50075 (2013).

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