Анализируя мышиной сотовых шванновских развития по Растущие аксоны
Summary
Здесь мы опишем Шванновских клеток (СК) миграции тест, в котором SCs могут развиваться расширения аксонов.
Abstract
Развитие периферических нервов, интригующий процесс. Нейроны посылают аксоны иннервируют конкретные цели, которых у людей часто являются более 100 см от сомы нейрона. Выживаемость нейронов в процессе развития зависит от целевой факторы роста, но и на поддержку шванновских клеток (СК). С этой целью SC ensheath аксоны из области нейронных сома (или переход от централизованного к периферической нервной системы) к синапса или нервно-мышечного соединения. Шванновские клетки являются производными нервного гребня и мигрируют в качестве предшественников по развивающиеся аксоны, пока весь аксон покрыт SCs. Это показывает важность SC миграции для развития периферической нервной системы и подчеркивает необходимость исследовать этот процесс. Для того чтобы проанализировать SC развитие, установка необходима, который рядом с ТЦ также включает их физиологическим субстратом для миграции, аксона. В связи с внутриутробного развития <eм> в естественных условиях покадровой обработки изображений, однако, не представляется возможным в плацентарной позвоночных, как мышь (муз мышцы). Чтобы обойти это, мы адаптировали верхний шейный ганглий (SCG) эксплантов техники. После лечения с фактором роста нервов (ФРН) SCG эксплантов расширить аксонов, а затем прекурсоров SC мигрируют вдоль аксонов из ганглия к периферии. Красота этой системы является то, что SC выводятся из пула эндогенных SC и что они мигрируют по своим физиологическим аксоны которых растут одновременно. Эта система особенно интригует, потому что развитие SC вдоль аксонов могут быть проанализированы покадровой обработки изображений, открытие дополнительных возможностей, чтобы получить представление миграции SC.
Protocol
Representative Results
Discussion
Развитие периферической нервной системы является захватывающим процессом. При развитии завершен, аксоны ensheathed по SCs по всей длине, которая может, у людей, часто более 100 см. Для этого нужное количество необходимых SCs должно быть установлено в процессе разработки и SCs также должны двигать…
Disclosures
The authors have nothing to disclose.
Acknowledgements
Мы хотим поблагодарить Урмас Arumae для обмена коллагена протокол и Ютта Фей и Урсула Hinz за отличную техническую помощь. Кроме того, мы хотели бы поблагодарить христианских Ф. Аккерман, Ульрике Энгель и Nikon Imaging центра при университете Гейдельберга, а также Йоахим Кирш за любезно помочь для видео shoting. Работа была частично финансируется за счет Deutsche Forschungsgemeinschaft (SFB 592).
Materials
| Name of Reagent/Material | Company | Catalogue Number | Comments |
| 10x MEM | Gibco | 21430 | |
| Sodium Bicarbonate (7.5%) | Gibco | 25080 | |
| Glutamine | Gibco | 25030 | |
| NaOH | Merck | 109137 | |
| NGF | Roche | 1058231 | R&D#556-NG-100 |
| Neurobasal Medium | Gibco | 21103 | |
| B27 Supplement | Gibco | 17504 | |
| antibiotics | Gibco | 15640 | |
| d-PBS | Gibco | 14040 | |
| insect needles | FST | 26002-20 | |
| syringe needle | Braun | BD # 300013 | |
| 8 well chamber slide | Lab tek | 177402 |
References
- Ebendal, T., Rush, R. A. . Use of collagen gels to bioassay nerve growth factor activity. IBRO Handh, (1989).
- Heermann, S., SchmÃcker, J., Hinz, U., Rickmann, M., Unterbarnscheidt, T., Schwab, M. H., Krieglstein, K. Neuregulin 1 type III/ErbB signaling is crucial for Schwann cell colonization of sympathetic axons. PloS One. 6 (12), e28692 (2011).
- Zuo, Y., Lubischer, J. L., Kang, H., Tian, L., Mikesh, M., Marks, A., Scofield, V. L. Fluorescent proteins expressed in mouse transgenic lines mark subsets of glia, neurons, macrophages, and dendritic cells for vital examination. The Journal of Neuroscience. The Official Journal of the Society for Neuroscience. 24 (49), 10999-11009 (2004).
- Levi-Montalcini, R., Booker, B. EXCESSIVE GROWTH OF THE SYMPATHETIC GANGLIA EVOKED BY A PROTEIN ISOLATED FROM MOUSE SALIVARY GLANDS. Proceedings of the National Academy of Sciences of the United States of America. 46 (3), 373-384 (1960).
- Meintanis, S., Thomaidou, D., Jessen, K. R., Mirsky, R., Matsas, R. The neuron-glia signal beta-neuregulin promotes Schwann cell motility via the MAPK pathway. Glia. 34 (1), 39-51 (2001).
- Yamauchi, J., Miyamoto, Y., Chan, J. R., Tanoue, A. ErbB2 directly activates the exchange factor Dock7 to promote Schwann cell migration. The Journal of cell biology. 181 (2), 351-365 (2008).
- Anton, E. S., Weskamp, G., Reichardt, L. F., Matthew, W. D. Nerve growth factor and its low-affinity receptor promote Schwann cell migration. Proceedings of the National Academy of Sciences of the United States of America. 91 (7), 2795-2799 (1994).
- Mahanthappa, N. K., Anton, E. S., Matthew, W. D. Glial growth factor 2, a soluble neuregulin, directly increases Schwann cell motility and indirectly promotes neurite outgrowth. The Journal of Neuroscience: The Official Journal of the Society for Neuroscience. 16 (15), 4673-4683 (1996).
- Yamauchi, J., Chan, J. R., Shooter, E. M. Neurotrophins regulate Schwann cell migration by activating divergent signaling pathways dependent on Rho GTPases. Proceedings of the National Academy of Sciences of the United States of America. 101 (23), 8774-8779 (2004).
- Gumy, L. F., Bampton, E. T. W., Tolkovsky, A. M. Hyperglycaemia inhibits Schwann cell proliferation and migration and restricts regeneration of axons and Schwann cells from adult murine DRG. Molecular and Cellular Neurosciences. 37 (2), 298-311 (2008).
- Sakaue-Sawano, A., Kurokawa, H., Morimura, T., Hanyu, A., Hama, H., Osawa, H., Kashiwagi, S. Visualizing spatiotemporal dynamics of multicellular cell-cycle progression. Cell. 132 (3), 487-498 (2008).
- Park, D., Don, A. S., Massamiri, T., Karwa, A., Warner, B., MacDonald, J., Hemenway, C. Noninvasive imaging of cell death using an Hsp90 ligand. Journal of the American Chemical Society. 133 (9), 2832-2835 (2011).
- Shcherbo, D., Souslova, E. A., Goedhart, J., Chepurnykh, T. V., Gaintzeva, A., Shemiakina, I. I., Gadella, T. W. J., Lukyanov, S., Chudakov, D. M. Practical and reliable FRET/FLIM pair of fluorescent proteins. BMC Biotechnology. 9, 24 (2009).
