Trans-vivo Überempfindlichkeit vom verzögerten Typ Assay für Antigen-spezifische Verordnung
Summary
Wir beschreiben eine wertvolle diagnostische Assays, die möglicherweise verwendet werden könnten, um den Abzug der Immunsuppression nach der Transplantation ohne erhöhten Risiko einer Abstoßungsreaktion zu entscheiden. Der Test basiert auf den Grundsätzen der Überempfindlichkeit vom verzögerten Typ und liefert genaue Beurteilung der beiden Spender spezifischen Effektor-und regulatorischen Immunantworten durch Empfänger montiert.
Abstract
Spättypallergie Antwort (DTH) ist ein schneller in vivo Manifestation der T-Zell-abhängige Immunantwort auf ein fremdes Antigen (Ag), dass das Immunsystem des Wirts hat in der jüngsten Vergangenheit erlebt. DTH-Reaktionen werden oft in einer Sensibilisierung Phase unterteilt, die sich auf der ersten Antigen Erfahrung und Herausforderung Phase, die in der Regel folgt einige Tage nach der Sensibilisierung. Das Fehlen einer Überempfindlichkeit vom verzögerten Typ Reaktion auf einen Rückruf Ag durch Hauttests nachgewiesen wird oft als Beweis für Anergie angesehen. Die traditionelle DTH-Assay wurde effektiv bei der Diagnose vieler mikrobieller Infektionen eingesetzt.
Trotz, die ähnliche Funktionen wie immun Lymphozyteninfiltration, Ödeme und Nekrosen, ist die direkte DTH keine praktikable diagnostische Technik bei transplantierten Patienten, da die Möglichkeit der direkten Einspritzung, was zur Sensibilisierung auf Spender-Antigene und Verlust des Transplantats. Um dieses Problem zu vermeiden, das Brummenein-zu-Maus "trans-vivo" DTH-Assay wurde 1,2 entwickelt. Dieser Test ist im Wesentlichen eine Übertragung DTH Test, wobei in menschlichen peripheren mononukleären Blutzellen (PBMCs) und Antigene wurden subkutan in die Ohrmuschel injiziert oder Fußballen naiven Maus und DTH-wie Schwellung nach 18-24 h 3 gemessen. Die Antigen-Präsentation von humanen Antigen-präsentierenden Zellen wie Makrophagen oder T-Zellen, DCs in gefäßreiches Mausgewebe löst die entzündliche Kaskade und zieht Maus Immunzellen, was zu Schwellung Antworten. Die Antwort ist Antigen-spezifischen Antigen und erfordert eine vorherige Sensibilisierung. Ein positiver Spender-reaktiven DTH-Reaktion in der Tv-DTH-Assay spiegelt wider, dass die transplantierten Patienten hat eine pro-inflammatorische Immunantwort Disposition zur Graft Alloantigene entwickelt.
Das wichtigste Merkmal dieses Assays ist, dass es auch verwendet werden, um regulatorische T-Zellen, die Zuschauer Unterdrückung verursachen detektieren. Bystander Unterdrückung einesDTH Rückruf Reaktion in Gegenwart von Donor-Antigen ist charakteristisch für Transplantationspatienten mit anerkannten Allotransplantate 2,4-14. Die Überwachung von Transplantationspatienten für Alloreaktivität und Regulierung durch Tv-DTH kann identifizieren eine Untergruppe von Patienten, die aus der Reduktion der Immunsuppression ohne erhöhtes Risiko einer Abstoßung oder sich verschlechternder Nierenfunktion profitieren könnten.
Ein viel versprechender Bereich ist die Anwendung des Tv-DTH-Assay bei der Überwachung von Autoimmunität 15,16 und auch in Tumorimmunologie 17.
Protocol
Representative Results
Discussion
Die trans-vivo DTH Test ein neuer diagnostischer Test mit einer möglichen klinischen Anwendung bei der Beurteilung zellvermittelte Antworten in der Transplantationsmedizin, Krebs und Autoimmunerkrankungen Patienten. Es ist wertvoll, weil es nicht nur nützlich bei der Überwachung Rückruf T Effektor Antworten ist, aber es kann auch regulatorische T-Antworten erkennen. Eine zuverlässige Möglichkeit, menschliche DTH Regulierung erkennen könnte Sicherheit von Immunsuppression Rückzug in Patienten, die Kandidaten für…
Disclosures
The authors have nothing to disclose.
Acknowledgements
Die Autoren bedanken sich bei den Beiträgen von AM VanBuskirk zur Entwicklung unseres Verständnisses des regulierten DTH-Reaktion in Transplantationspatienten anzuerkennen. Diese Arbeit wurde unterstützt NIH Zuschüsse PO1AI084853 und R01AI066219-06, und von der EU-geförderten einer Studie.
Materials
| Name of the reagent | Company | Catalogue number | Comments (optional) |
| ACD tube for blood collection | BD | 02-684-26 | |
| Lymphocyte Separation Medium | Cellgro | 25-072-CV | |
| Dulbecco’s Phosphate-Buffered Saline | Cellgro | 21-031-CM | Without calcium & magnesium |
| ACK Lysis Buffer | BioWhittaker | 10-548E | |
| TT/DT or EBV | Sanofi Pasteur Inc./ Meridian Life Science, Inc. | TT/DT 25 μg/injection EBV 8 μg/injection | |
| Protease inhibitor PMSF | Sigma-Aldrich | 78830 | |
| Eosine for cell count | Sigma-Aldrich | E-6003 | |
| Alloantigen | Purified HLA antigens, synthetic allopeptides can be used instead of donor cell-free lysates | ||
| 50 ml sterile centrifuge tubes | Fisher Scientific | 06-443-18 | |
| 10 ml pipettes and pipettor | BD Falcon | 13-675-20 | |
| 2 ml safe-lock tubes | Costar | 3213 | |
| 1000 μl, 100 μl , 10 μl pipettes with sterile tips | |||
| Hemocytometer | Fisher | 02-671-10 | |
| Full size centrifuge and microfuge | Beckman Coulter/Eppendorf | ||
| 1/2cc or 1cc insulin syringes | Becton Dickinson | 14-826-79 | 28 gauge |
| Vibracell sonicator | Divtech Equipment Co. Sonocs& Materials Inc | 2 mm probe | |
| Dial thickness gauge | Mitutoyo, Japan | ||
| SCID mice | Harlan | ||
| Isoflurane | Piramal Healthcare | Inhalant anesthesia |
References
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