عبر الجسم الحي فرط الحساسية النوع المتأخر الفحص ل Antigen تنظيم محدد
Summary
نحن تصف مقايسة التشخيص القيمة التي يمكن استخدامها لاتخاذ قرار الانسحاب من كبت المناعة بعد زرع من دون مخاطر مرتفعة من رفض الكسب غير المشروع. يستخدم فحص مبادئ تأخر نوع فرط الحساسية ويوفر تقييم دقيق لكلا المانحة محددة المستجيب والتنظيمية الاستجابات المناعية التي شنت من قبل المستفيدين.
Abstract
تأخر استجابة من نوع فرط الحساسية (DTH) هو سريع في مظهر الجسم الحي من T الاستجابة المناعية التي تعتمد على خلية لمستضد الأجنبية (AG) أن النظام المناعي المضيف شهدت في الماضي القريب. غالبا ما تنقسم التفاعلات DTH إلى مرحلة التوعية، مشيرا إلى التجربة الأولية مستضد، ومرحلة التحدي، والذي يتبع عادة بعد عدة أيام التوعية. يعتبر كثير من الأحيان لعدم وجود تأخر من نوع فرط الحساسية استجابة إلى حج استدعاء يتبين من اختبار الجلد كدليل على استعطال. وقد تم فحص البيوت التقليدية المستخدمة بشكل فعال في تشخيص العديد من الالتهابات الجرثومية.
على الرغم من تقاسم ميزات المناعة مماثلة مثل تسلل لمفاوية، وذمة، ونخر الأنسجة، وDTH المباشرة ليست تقنية التشخيص ممكنا في مرضى زرع بسبب إمكانية الحقن المباشر مما أدى إلى توعية لمستضدات المانحة وفقدان الكسب غير المشروع. لتجنب هذه المشكلة، وهمهمةتم وضع إلى الفأر "عبر الجسم الحي" DTH مقايسة 1،2. هذا الاختبار هو في جوهره نقل DTH الفحص، التي تم حقن الخلايا البشرية في الدم المحيطي وحيدات النوى (PBMCs) ومستضدات محددة تحت الجلد في pinnae أو قاطع الطريق على فأرة الحاسوب السذاجة والبيوت مثل تورم يقاس بعد 18-24 ساعة 3. عرض المستضد بواسطة الخلايا مستضد تقديم الإنسان مثل الضامة أو البلدان النامية إلى خلايا T في الأنسجة الوعائية للغاية الماوس يتسبب في تتالي التهابات وتجذب الخلايا المناعية الماوس مما أدى إلى ردود التورم. الرد هو مستضد محددة ويتطلب توعية مستضد قبل. A إيجابية استجابة DTH المانحة التفاعلي في مقايسة تلفزيون DTH يعكس أن مريض زرع وضعت التصرف المناعة الموالية للالتهابات نحو alloantigens الكسب غير المشروع.
الميزة الأكثر أهمية من هذا الاختبار هو أنه يمكن أيضا أن تستخدم لكشف الخلايا التائية التنظيمية، التي تتسبب في قمع المارة. قمع المارة منDTH استجابة نذكر في وجود مستضد المانحة هو سمة من متلقى مع المغايرة المقبولة 2،4-14. قد رصد متلقى للalloreactivity والتنظيم من قبل تلفزيون DTH تحديد مجموعة فرعية من المرضى الذين يمكن أن يستفيدوا من تخفيض المناعة من دون مخاطر مرتفعة من الرفض أو تدهور وظائف الكلى.
ثمة مجال واعد هو تطبيق للمقايسة تلفزيون DTH في رصد المناعة الذاتية 15،16 وأيضا في ورم المناعة 17.
Protocol
Representative Results
Discussion
وDTH مقايسة عبر الجسم الحي هو اختبار تشخيصي الرواية مع التطبيق السريري المحتملة في تقييم الاستجابات الخلية بوساطة في زرع والسرطان ومرضى المناعة الذاتية. ومن المفيد لأنه مفيد ليس فقط في رصد استدعاء استجابات المستجيب T، ولكن أيضا فإنه يمكن الكشف عن استجابات التنظيمية T….
Disclosures
The authors have nothing to disclose.
Acknowledgements
فإن الكتاب أود أن أنوه مساهمات AM VanBuskirk في تطوير فهمنا للاستجابة DTH التنظيم في متلقى. وأيد هذا العمل منح المعاهد الوطنية للصحة PO1AI084853 وR01AI066219-06، والتي ترعاها الاتحاد الأوروبي دراسة واحدة.
Materials
| Name of the reagent | Company | Catalogue number | Comments (optional) |
| ACD tube for blood collection | BD | 02-684-26 | |
| Lymphocyte Separation Medium | Cellgro | 25-072-CV | |
| Dulbecco’s Phosphate-Buffered Saline | Cellgro | 21-031-CM | Without calcium & magnesium |
| ACK Lysis Buffer | BioWhittaker | 10-548E | |
| TT/DT or EBV | Sanofi Pasteur Inc./ Meridian Life Science, Inc. | TT/DT 25 μg/injection EBV 8 μg/injection | |
| Protease inhibitor PMSF | Sigma-Aldrich | 78830 | |
| Eosine for cell count | Sigma-Aldrich | E-6003 | |
| Alloantigen | Purified HLA antigens, synthetic allopeptides can be used instead of donor cell-free lysates | ||
| 50 ml sterile centrifuge tubes | Fisher Scientific | 06-443-18 | |
| 10 ml pipettes and pipettor | BD Falcon | 13-675-20 | |
| 2 ml safe-lock tubes | Costar | 3213 | |
| 1000 μl, 100 μl , 10 μl pipettes with sterile tips | |||
| Hemocytometer | Fisher | 02-671-10 | |
| Full size centrifuge and microfuge | Beckman Coulter/Eppendorf | ||
| 1/2cc or 1cc insulin syringes | Becton Dickinson | 14-826-79 | 28 gauge |
| Vibracell sonicator | Divtech Equipment Co. Sonocs& Materials Inc | 2 mm probe | |
| Dial thickness gauge | Mitutoyo, Japan | ||
| SCID mice | Harlan | ||
| Isoflurane | Piramal Healthcare | Inhalant anesthesia |
References
- Carrodeguas, L., et al. Trans vivo analysis of human delayed-type hypersensitivity reactivity. Hum. Immunol. 60, 640-651 (1999).
- VanBuskirk, A. M., et al. Human allograft acceptance is associated with immune regulation. J. Clin. Invest. 106, 145-155 (2000).
- Burlingham, W. J., Jankowska-Gan, E. Mouse strain and injection site are crucial for detecting linked suppression in transplant recipients by trans-vivo DTH assay. Am. J. Transplant. 7, 466-470 (2007).
- Burlingham, W. J., et al. Loss of tolerance to a maternal kidney transplant is selective for HLA class II: Evidence from trans-vivo DTH and alloantibody analysis. Human Immunology. 61, 1395-1402 (2000).
- Geissler, F., et al. Human liver allograft acceptance and the ‘tolerance assay’: In vitro anti-donor T cell assays show hyporeactivity to donor cells but, unlike DTH, fail to detect linked suppression. Transplantation. 72, 571-580 (2001).
- Jankowska-Gan, E., et al. Human liver allograft acceptance and the ‘tolerance assay’. II. donor HLA-A, -B but not DR antigens are able to trigger regulation of DTH. Hum. Immunol. 63, 862 (2002).
- Cai, J., et al. Minor H Antigen HA-1-specific Regulator and Effector CD8+ T Cells, and HA-1 Microchimerism, in Allograft Tolerance. J. Exp. Med. 199, 1017-1023 (2004).
- Rodriguez, D. S., et al. Immune regulation and graft survival in kidney transplant recipients are both enhanced by human leukocyte antigen matching. Am. J. Transplant. 4, 537-543 (2004).
- Xu, Q., et al. Human CD4+CD25low adaptive T regulatory cells suppress delayed-type hypersensitivity during transplant tolerance. J. Immunol. 178, 3983-3995 (2007).
- Derks, R. A., Jankowska-Gan, E., Xu, Q., Burlingham, W. J. Dendritic cell type determines the mechanism of bystander suppression by adaptive T regulatory cells specific for the minor antigen HA-1. J. Immunol. 179, 3443-3451 (2007).
- Jankowska-Gan, E., et al. Successful reduction of immunosuppression in older renal transplant recipients who exhibit donor-specific regulation. Transplantation. 88, 533-541 (2009).
- Jankowska-Gan, E., et al. Pretransplant immune regulation predicts allograft outcome: bidirectional regulation correlates with excellent renal transplant function in living-related donor-recipient pairs. Transplantation. 93, 283-290 (2012).
- Knechtle, S. J., et al. Early and limited use of tacrolimus to avoid rejection in an alemtuzumab and sirolimus regimen for kidney transplantation: clinical results and immune monitoring. Am. J. Transplant. 9, 1087-1098 (2009).
- Haynes, L. D., et al. Donor-specific indirect pathway analysis reveals a B-cell-independent signature which reflects outcomes in kidney transplant recipients. Am. J. Transplant. 12, 640-648 (2012).
- Burlingham, W. J., et al. IL-17-dependent cellular immunity to collagen type V predisposes to obliterative bronchiolitis in human lung transplants. J. Clin. Invest. 117, 3498-3506 (2007).
- Bobadilla, J. L., et al. TH-17, Monokines, Collagen Type V, and Primary Graft Dysfunction in Lung Transplantation. Am. J. Respir. Crit. Care Med. 177 (6), (2008).
- Olson, B. M., et al. Human prostate tumor antigen-specific CD8+ regulatory T cells are inhibited by CTLA-4 or IL-35 blockade. J. Immunol. 189, 5590-5601 (2012).
