Imágenes bacteriana Bioluminiscente<em> En Vivo</em
Summary
En este artículo se describe la administración de<em> Lux-etiquetado</em> Bacterias a ratones y posteriores<em> In vivo</em> Análisis utilizando imágenes IVIS bioluminiscencia.
Abstract
Este video describe el uso de todo el cuerpo bioluminesce formación de imágenes (BLI) para el estudio del tráfico bacteriana en ratones vivos, con énfasis en el uso de bacterias en terapia génica y celular para el cáncer. Las bacterias presentes una clase de vector atractivo para la terapia del cáncer, que posee una capacidad natural para crecer preferentemente dentro de los tumores después de la administración sistémica. Las bacterias genéticamente para expresar el gen lux casete permiso BLI detección de las bacterias y al mismo tiempo sitios de tumor. La ubicación y los niveles de las bacterias dentro de los tumores con el tiempo puede ser fácilmente examinado, visualizado en dos o tres dimensiones. El método es aplicable a una amplia gama de especies bacterianas y tipos de tumores de xenoinjertos. En este artículo se describe el protocolo para el análisis de bacterias bioluminiscentes en ratones portadores de tumores subcutáneos. La visualización de las bacterias comensales en el tracto gastrointestinal (GIT) por BLI también se describe. Este potente y barato, imágenes en tiempo real representación estrategiats un método ideal para el estudio de las bacterias in vivo en el contexto de la investigación del cáncer, en terapia génica particular, y las enfermedades infecciosas. Este video muestra el procedimiento para el estudio de lux-etiquetados E. coli en ratones vivos, lo que demuestra la lectura espacial y temporal alcanzable BLI utilizar con el sistema IVIS.
Protocol
Discussion
En el contexto de la terapia génica, la utilización de agentes biológicos para la entrega de genes terapéuticos a los pacientes ha demostrado una gran promesa 3-5. Al igual que los virus, las propiedades biológicas innatas de bacterias permitir el suministro eficiente de ADN a células o tejidos, en particular en el contexto del cáncer. Se ha demostrado que las bacterias son naturalmente capaces de homing a los tumores por administración sistémica que resulta en niveles altos de replicación a nivel l…
Disclosures
The authors have nothing to disclose.
Acknowledgements
Los autores desean agradecer el apoyo pertinente a este manuscrito de la Comisión Europea del Séptimo Programa Marco (PIOF-GA-2009-255.466) y el Consejo de Investigación en Salud de Irlanda (HRA_POR/2010/138). Lux-etiquetados E. coli fue una especie de regalo del doctor Cormac Gahan, University College Cork.
Materials
| Name of the reagent | Company | Catalogue number | Comments |
| 4T1 cell line | ATCC | CRL-2539 | Syngeneic breast cancer model derived from a spontaneously arising BALB/c mammary tumor |
| DMEM | Sigma-Aldrich | D6429 | Dulbecco’s Modified Eagle’s Medium |
| PBS | Sigma-Aldrich | D8537 | Phosphate Buffered Saline |
| Xenogen IVIS | Caliper Life Sciences | IVIS 100 for 2D imaging; IVIS Spectrum for 3D. | |
| Luria Broth Miller (LB) | Sigma-Aldrich | L2542 | Growth medium for E. coli |
| Erythromycin | Sigma-Aldrich | E5389 | Antibiotic |
| Streptomycin | Sigma-Aldrich | S9137 | Antibiotic |
| MF1nu/nu mice | Harlan (UK) | 069(nu)/070(nu/+) | Hsd:Athymic Nude-Foxn1nu |
| Balb/c mice | Harlan (UK) | 066 | Haplotype: H-2d |
| Gavage needle | Vet-tech Solutions (UK) | DE009 | 22G x 38mm straight gavage needle |
| Syringe for IV injection | BD BioSciences | 309309 – 1 ml | Insulin syringe with 28 G x ½ inch micro-fine IV needle. |
| Syringe for tumor inoculation | Braun | 9161376V | Omnifix 26 G x ½ inch needle |
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