Bioluminescent Bakterielle Imaging<em> In Vivo</em
Summary
Dieser Artikel beschreibt die Verwaltung von<em> Lux-getaggten</em> Bakterien an Mäusen und anschließende<em> In vivo</em> Analyse mit IVIS Biolumineszenz-Bildgebung.
Abstract
Dieses Video beschreibt den Einsatz des ganzen Körpers bioluminesce Imaging (BLI) für die Untersuchung von bakteriellen Handel mit lebenden Mäusen, mit einem Schwerpunkt auf der Verwendung von Bakterien in der Gen-und Zelltherapie bei Krebs. Bakterien stellen eine attraktive Klasse von Vektor für die Krebstherapie, die über eine natürliche Fähigkeit, vorzugsweise wachsen innerhalb Tumoren nach systemischer Verabreichung. Bakterien entwickelt, um die lux Genkassette Erlaubnis BLI Nachweis der Bakterien und gleichzeitig Tumorstellen auszudrücken. Die Lage und Höhe der Bakterien innerhalb Tumoren im Laufe der Zeit leicht geprüft werden kann, visualisiert in zwei oder drei Dimensionen. Das Verfahren ist für ein breites Spektrum von Bakterien-Spezies und Tumorxenotransplantat Typen. Dieser Artikel beschreibt das Protokoll für die Analyse der Biolumineszenz Bakterien im subkutanen Tumor tragenden Mäusen. Visualisierung von symbiotischer Bakterien im Magen-Darm-Trakt (GIT) von BLI wird ebenfalls beschrieben. Diese leistungsstarke und billig, Bildgebung in Echtzeit Strategie Vertreterts eine ideale Methode zur Untersuchung von Bakterien in vivo im Kontext der Krebsforschung, insbesondere Gentherapie, und Infektionskrankheiten. Dieses Video beschreibt das Verfahren für die Untersuchung lux-markierten E. coli in lebenden Mäusen, zeigt die räumliche und zeitliche Auslesen erreichbaren Nutzung BLI mit dem IVIS System.
Protocol
Discussion
Im Rahmen der Gentherapie hat sich die Verwendung von biologischen Agenzien zur Abgabe von therapeutischen Genen für Patienten sehr vielversprechend 3-5 gezeigt. Wie Viren erlauben die angeborenen biologischen Eigenschaften von Bakterien effizienten DNA-Abgabe an Zellen oder Gewebe, insbesondere im Zusammenhang mit Krebserkrankungen. Es hat sich gezeigt, daß Bakterien in der Lage sind natürlich Homing auf Tumoren, wenn systemisch verabreicht, was zu hohen Replikation lokal entweder außerhalb (nicht-invasi…
Disclosures
The authors have nothing to disclose.
Acknowledgements
Die Autoren möchten die Unterstützung in bezug auf dieses Manuskript von der Europäischen Kommission Siebten Rahmenprogramms (PIOF-GA-2009 bis 255.466) und dem Irish Health Research Board (HRA_POR/2010/138) quittieren. Lux-markierten E. coli war eine Art Geschenk von Dr. Cormac Gahan, University College Cork.
Materials
| Name of the reagent | Company | Catalogue number | Comments |
| 4T1 cell line | ATCC | CRL-2539 | Syngeneic breast cancer model derived from a spontaneously arising BALB/c mammary tumor |
| DMEM | Sigma-Aldrich | D6429 | Dulbecco’s Modified Eagle’s Medium |
| PBS | Sigma-Aldrich | D8537 | Phosphate Buffered Saline |
| Xenogen IVIS | Caliper Life Sciences | IVIS 100 for 2D imaging; IVIS Spectrum for 3D. | |
| Luria Broth Miller (LB) | Sigma-Aldrich | L2542 | Growth medium for E. coli |
| Erythromycin | Sigma-Aldrich | E5389 | Antibiotic |
| Streptomycin | Sigma-Aldrich | S9137 | Antibiotic |
| MF1nu/nu mice | Harlan (UK) | 069(nu)/070(nu/+) | Hsd:Athymic Nude-Foxn1nu |
| Balb/c mice | Harlan (UK) | 066 | Haplotype: H-2d |
| Gavage needle | Vet-tech Solutions (UK) | DE009 | 22G x 38mm straight gavage needle |
| Syringe for IV injection | BD BioSciences | 309309 – 1 ml | Insulin syringe with 28 G x ½ inch micro-fine IV needle. |
| Syringe for tumor inoculation | Braun | 9161376V | Omnifix 26 G x ½ inch needle |
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