Summary

Imagem bacteriana Bioluminescent<em> Em Vivo</em

Published: November 04, 2012
doi:

Summary

Este artigo descreve a administração de<em> Lux-marcado</em> Bactérias a ratos e subseqüentes<em> In vivo</em> Análise usando IVIS imagem de bioluminescência.

Abstract

Este vídeo descreve o uso de todo o corpo bioluminesce imaging (BLI) para o estudo de tráfico bacteriana em ratos vivos, com ênfase no uso de bactérias na terapia génica e celular para o cancro. As bactérias presentes uma classe atraente de vetor para terapia de câncer, possuindo uma capacidade natural de crescer preferencialmente dentro de tumores após a administração sistêmica. As bactérias manipuladas para expressar o gene lux cassete autorização BLI detecção das bactérias e simultaneamente locais tumorais. A localização e níveis de bactérias ao longo do tempo dentro de tumores pode ser facilmente examinado, visualizado em duas ou três dimensões. O método é aplicável a uma ampla variedade de espécies bacterianas e tipos de xenoenxertos de tumor. Este artigo descreve o protocolo para a análise de bactérias bioluminescentes dentro ratinhos portadores de tumores subcutâneos. A visualização das bactérias comensais no tracto gastrointestinal (TGI) por BLI é também descrito. Este poderoso e barato, em tempo real representação estratégia de imagemts um método ideal para o estudo da bactéria in vivo no contexto da pesquisa de cancro, em particular, a terapia génica, e doenças infecciosas. Este vídeo descreve o procedimento para estudar lux-marcado E. coli em murganhos vivos, demonstrando a leitura espacial e temporal BLI alcançável utilizando o sistema IVIS.

Protocol

1. Indução de tumores Para a indução do tumor de rotina, a dose tumorigénica mínima de células em suspensão em 200 uL de meio isento de soro da cultura foi injectado por via subcutânea (sc) no flanco de infecção livre 6-8 semanas de idade, ratinhos fêmea Balb / C ou atímicos MF1-nu/nu n = 6 (Harlan, Oxfordshire, Reino Unido) (1 x 10 6 células 4T1), utilizando uma agulha de seringa de calibre 21. A viabilidade de células utilizadas para inoculação foi superior a 95%, tal como determ…

Discussion

No contexto da terapia genética, o uso de agentes biológicos para a entrega de genes terapêuticos para pacientes mostrou uma grande promessa 3-5. Como vírus, as propriedades biológicas de bactérias inatas permitir a entrega eficiente do ADN a células ou tecidos, em particular no contexto do cancro. Tem sido demonstrado que as bactérias são naturalmente capazes de homing para tumores quando administrados sistemicamente, resultando em níveis elevados de replicação localmente, quer externas (para nã…

Disclosures

The authors have nothing to disclose.

Acknowledgements

Os autores gostariam de agradecer o apoio relevante para este manuscrito da Comissão Europeia Sétimo Programa-Quadro (PIOF-GA-2009-255466) e do Conselho de Pesquisa irlandês Saúde (HRA_POR/2010/138). Lux-marcado E. coli foi um presente tipo de Dr. Cormac Gahan, Universidade College Cork.

Materials

Name of the reagent Company Catalogue number Comments
4T1 cell line ATCC CRL-2539 Syngeneic breast cancer model derived from a spontaneously arising BALB/c mammary tumor
DMEM Sigma-Aldrich D6429 Dulbecco’s Modified Eagle’s Medium
PBS Sigma-Aldrich D8537 Phosphate Buffered Saline
Xenogen IVIS Caliper Life Sciences   IVIS 100 for 2D imaging; IVIS Spectrum for 3D.
Luria Broth Miller (LB) Sigma-Aldrich L2542 Growth medium for E. coli
Erythromycin Sigma-Aldrich E5389 Antibiotic
Streptomycin Sigma-Aldrich S9137 Antibiotic
MF1nu/nu mice Harlan (UK) 069(nu)/070(nu/+) Hsd:Athymic Nude-Foxn1nu
Balb/c mice Harlan (UK) 066 Haplotype: H-2d
Gavage needle Vet-tech Solutions (UK) DE009 22G x 38mm straight gavage needle
Syringe for IV injection BD BioSciences 309309 – 1 ml Insulin syringe with 28 G x ½ inch micro-fine IV needle.
Syringe for tumor inoculation Braun 9161376V Omnifix 26 G x ½ inch needle

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Cite This Article
Baban, C. K., Cronin, M., Akin, A. R., O’Brien, A., Gao, X., Tabirca, S., Francis, K. P., Tangney, M. Bioluminescent Bacterial Imaging In Vivo. J. Vis. Exp. (69), e4318, doi:10.3791/4318 (2012).

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