Medición de los efectos de anticuerpos en la función celular de cardiomiocitos aislados

La cardiomiopatía dilatada (DCM) es una de las principales causas de la insuficiencia cardíaca en los adultos más jóvenes ^1. Aunque la disposición genética y exposición a sustancias tóxicas se conocen las causas de esta enfermedad en aproximadamente un tercio de los pacientes, el origen de DCM sigue siendo en gran medida poco clara. En un número importante de estos pacientes, los autoanticuerpos dirigidos contra epítopos cardíacas se ha detectado y se sospecha que juegan un papel central en la aparición y progresión de la enfermedad de ^2,3. La importancia de autoanticuerpos cardiacas está subrayado por una mejoría hemodinámica en pacientes DCM después de la eliminación de autoanticuerpos por inmunoadsorción ^3-5. Una variedad de antígenos específicos ya se han identificado ^2,3 y anticuerpos contra estos objetivos se pueden detectar mediante inmunoensayos. Sin embargo, estos ensayos no pueden discriminar entre la estimulación (y, por tanto funcionalmente eficaz) y el bloqueo de los autoanticuerpos. Existen cada vez más evidence que esta distinción es crucial ^6,7. También se puede suponer que los objetivos para un número de anticuerpos cardiotrópicos están aún sin identificar y por lo tanto no se puede detectar por inmunoensayos. Por lo tanto, se estableció un método para la detección de anticuerpos funcionalmente activos cardiotrópicos, independientemente de su antígeno respectivo. El fondo para el método es la alta homología generalmente observado para las regiones funcionales de las proteínas cardiacas en mamíferos entre ^8,9. Esto sugiere que los anticuerpos dirigidos contra los antígenos cardíacos humanos se reacciona de forma cruzada con las células diana no humanos, lo que permite las pruebas de IgG de pacientes con MCD en cardiomiocitos de ratas adultas. Nuestro método consta de 3 etapas: primero, la IgG es aislada del plasma del paciente utilizando sefarosa acoplados anti-IgG de anticuerpos obtenidos a partir de columnas de inmunoadsorción (PlasmaSelect, Teterow, Alemania). Segundo, los cardiomiocitos adultos son aislados por perfusión de colagenasa en un aparato de perfusión de Langendorff utilizando aprotocolo modificado a partir de trabajos previos ^10,11. Los cardiomiocitos obtenidos se adjuntan a la laminina cubreobjetos recubiertos de cámara y se tiñeron con Fura-2, un tinte fluorescente de calcio selectivo que puede ser fácilmente llevado en la célula para observar el calcio intracelular (Ca ^{2 +)} contenidos ^12. En el último paso, el efecto de la paciente IgG en el acortamiento celular y Ca ^{2 +} transitorios de cardiomiocitos de campo estimuladas se monitoriza en línea utilizando una cálcico comercial miocitos y contractilidad sistema de monitorización (IonOptix, Milton, MA, EE.UU.), conectado a un fluorescente típica inversa microscopio.