Стекловаты фильтры для концентрирования водной основе вирусов и сельскохозяйственной зоонозных патогенов
Summary
Фильтры из стекловаты были использованы для концентрации водных вирусов, ряд научно-исследовательских групп по всему миру. Здесь мы показываем, простой подход к построению фильтров стекловаты и продемонстрировать фильтры также эффективны в воде концентрации вирусных, бактериальных и протозойных патогенов.
Abstract
Важным первым шагом в оценке уровня возбудителя при подозрении на загрязненной воды концентрация. Концентрация методы, как правило, специфичные для определенного возбудителя группы, например, охране окружающей среды США Метод 1623 для Giardia и Cryptosporidium 1, что означает несколько методов требуется, если выборка программа ориентирована на более чем одним возбудителем группы. Другим недостатком существующих методов является оборудование может быть сложным и дорогим, например, VIRADEL метод 1MDS фильтра для концентрирования вирусов 2. В этой статье мы расскажем, как построить фильтры стекловаты для концентрирования водных патогенов. После того, как фильтр элюирования, концентрат поддается второй этап концентрации, таких как центрифугирования, после чего возбудитель обнаружения и подсчета культурной или молекулярных методов. Фильтры имеют ряд преимуществ. Строительство легко и фильтры могут быть построены дляНью-Йорк размер для удовлетворения специфических требований отбора. Фильтр части стоят недорого, что позволяет собрать большое количество образцов, не сильно влияет бюджета проекта. Большие объемы выборки (100s до 1000 с L) может быть сосредоточено в зависимости от скорости засорения от образца мутности. Фильтры портативный и с минимальным оборудованием, таким как насоса и расходомера, они могут быть реализованы в области отбора проб готовой питьевой воды, поверхностных вод, подземных вод и сельскохозяйственных стоков. Наконец, стекловата фильтрации является эффективным для концентрации различных типов возбудителей это только один из методов не требуется. Здесь мы сообщаем о фильтре эффективность в концентрации водных человека энтеровирусы, S almonella enterica, Cryptosporidium parvum и вируса птичьего гриппа.
Protocol
Discussion
Фильтры из стекловаты были использованы несколько исследовательских групп 3,5,6 сосредоточиться человека кишечными вирусами из различных водных источников, таких как питьевая вода закончила 7, 8,9 подземные, поверхностные воды 10, морской воды 11, сточные воды 12</s…
Disclosures
The authors have nothing to disclose.
Acknowledgements
Мы благодарим Уильям Т. Эккерта для повествующая видео. Разработка протокола стекловолокна была частью водного Висконсин и здоровье судебных для кишечных риски (WAHTER исследований), финансируемого США EPA ЗВЕЗДА Грант R831630. Аляска образцы, собранные А. Ривз, А. Реми, Б. Meixell при финансовой поддержке Геологической службы США. Любое использование торговых, продуктов и фирменных наименований для описательный характер и не означает одобрения со стороны правительства США.
Materials
| Name of reagent or item | Company | Catalogue number |
| Hydrochloric acid | Fisher Scientific | A144-500 |
| Sodium hydroxide | Fisher Scientific | BP359-212 |
| Phosphate Buffered Saline Sodium chloride Potassium phosphate-dibasic Potassium phosphate-monobasic |
Fisher Scientific Fisher Scientific Fisher Scientific |
BP358-212 BP363-500 BP362-500 |
| Sodium hypochlorite i.e., household bleach | The Clorox Co. | |
| Sodium thiosulfate, anhydrous | Fisher Scientific | S 475-212 |
| Beef extract, desiccated | Becton, Dickinson and Company | 211520 |
| Glycine | Fisher Scientific | G46-500 |
| Oiled sodocalcic glass wool
Or R-11 unfaced fiberglass insulation |
Isover
Johns Manville |
Bourre 725 QN |
| Polypropylene mesh | Industrial Netting | xN4510 |
| 2″x4″ Sch 80 PVC threaded pipe nipple | Grainger | 6MW35 |
| 2″ Sch 40 PVC cap | Grainger | 5WDW3 |
| Male adapter nylon fitting (1/2″x1/2″) | US Plastic Corp. | 62178 |
| Sample bottles for eluate- 1 liter | Fisher Scientific | 03-313-4F |
| 60 mL syringe | Fisher Scientific | NC9661991 |
| pH strips | Whatman | 2614 991 |
| Prefilter, Polypropylene, 10 inch cartridge, 10 μm | McMaster-Carr | 4411K75 |
| Prefilter housing | Cole-Parmer | S-29820-10 |
References
- US Environmental Protection Agency. Method 1623: Cryptosporidium and Giardia in Water by Filtration/IMS/FA. EPA 815-R-05-002. , (2012).
- Cashdollar, J. L., Dahling, D. R. Evaluation of a method to re-use electropositive cartridge filters for concentrating viruses from tap and river water. J. Virol. Methods. 132, 13-17 (2006).
- Lambertini, E. Concentration of enteroviruses, adenoviruses, and noroviruses from drinking water by use of glass wool filters. Appl. Environ. Microbiol. 74, 2990-2996 (2008).
- Spackman, E. Development of a real-time reverse transcription PCR assay for Type A influenza virus and the avian H5 and H7 hemagglutinin subtypes. J. Clin. Microbiol. 40, 3256-3260 (2002).
- Environment Agency. Optimisation of a new method for detection of viruses in groundwater. Report No. NC/99/40. , (2000).
- Vilaginés, P., Sarrette, B., Husson, G., Vilaginés, R. Glass wool for virus concentration at ambient water pH level. Water Sci. Technol. 27, 299-306 (1993).
- Vivier, J. C., Ehlers, M. M., Grabow, W. O. Detection of enteroviruses in treated drinking water. Water Res. 38, 2699-2705 (2004).
- Powell, K. L., Sililo, O. . Enteric virus detection in groundwater using a glass wool trap. In: Groundwater: Past Achievements and Future Challenges. , 813-816 (2000).
- Hunt, R. J., Borchardt, M. A., Richards, K. D., Spencer, S. K. Assessment of sewer source contamination of drinking water wells using tracers and human enteric viruses. Environ. Sci. Technol. 44, 7956-7963 (2010).
- van Heerden, J., Ehlers, M. M., Heim, A., Grabow, W. O. Prevalence, quantification and typing of adenoviruses detected in river and treated drinking water in South Africa. J. Appl. Microbiol. 99, 234-242 (2005).
- Vilaginés, P. Round robin investigation of glass wool method for poliovirus recovery from drinking water and sea water. Water Sci. Technol. 35, 445-449 (1997).
- Gantzer, C., Senouci, S., Maul, A., Levi, Y., Schwartzbrod, L. Enterovirus genomes in wastewater: concentration on glass wool and glass powder and detection by RT-PCR. J. Virol. Methods. 65, 265-271 (1997).
- Borchardt, M. A., Jokela, W. E., Spencer, S. K. Pathogen losses in surface water runoff from dairy manure applied to corn fields. , (2011).
- Deboosere, N. Development and validation of a concentration method for the detection of influenza A viruses from large volumes of surface water. Appl. Environ. Microbiol. 77, 3802-3808 (2011).
- Lambertini, E. Virus contamination from operation and maintenance practices in small drinking water distribution systems. J. Water Health. 9, 799-812 (2011).
