Belli koşullarda kültüre zaman Mycobacterium tuberculosis ilaç hoşgörülü biyofilm oluşturmaktadır. Burada kültür M. yöntemleri tarif tuberculosis biyofilmler ve ilaç tolerans persisters sıklığını belirlenmesi. Bu protokoller M. ilaç hoşgörü mekanizmalarına daha sonraki çalışmalar için faydalı olacaktır tüberküloz.
Mycobacterium tuberculosis, insan tüberküloz etyolojik ajan, antibiyotikler de dahil olmak üzere çevresel streslere karşı hayatta kalabilmek için olağanüstü bir yeteneği vardır. Rağmen M. stres toleransı tüberkülozu, tüm tüberküloz 1 6 aylık uzun kemoterapi olasılıkla katkıda biridir, patojen bu özelliği fenotip altında yatan moleküler mekanizmaları tam olarak bilinmemektedir. Birçok mikrobiyal türlerin biyofilm 2-4 olarak adlandırılan son derece organize, bağlı yüzey ve matris kapsüllü yapılarda kendine montaj tarafından stresli ortamlarda hayatta kalmak için evrildi. Topluluklarda Büyüme mikropların tercih edilen bir hayatta kalma stratejisi gibi görünüyor, ve yüzey eki, hücrelerarası iletişimi ve hücre dışı polimerik maddelerin sentezi (EPS) 5,6 düzenleyen genetik bileşenleri yoluyla elde edilir. Çevresel strese toleransı olasılıkla physiolo belki de EPS kolaylaştırdı ve birbiyofilmlerin 7 karmaşık mimarisi içindeki heterojen mikroçevrelerde bireysel basilinin cerrahi adaptasyonu.
Son kağıtları bir dizi biz kurduğu M. tüberküloz ve Mycobacterium smegmatis'in fazla 50 kez anti-tüberküloz ilaçlar izoniazid ve rifampisin 8-10 minimal inhibitör konsantrasyonları tolere edebilir biyofilm olarak adlandırılan organize çok hücreli yapılar büyümeye güçlü bir eğilimi, var. M. ortamı gibi bir atmosfer havası ile 9 arasında, sınırlı değişimi: tüberküloz, bununla birlikte, ilgi çekici tepe boşluğu özellikle 9:01 oranında olgun biyofilmlerde, oluşturmak için spesifik koşulları gerektirmektedir. Özel çevre koşullarının Gereksinimleri muhtemelen o M. gerçeği ile bağlantılı olabilir tüberküloz, zorunlu insan patojeni ve böylece doku ortamlara adapte olmuştur. Bu yayının biz kültür M. yöntemleri göstermek tüberkülozbir şişe ve bakteriyolojik yanı sıra genetik çalışmalar için uygun bir 12 de plaka biçiminde biyofilmler. Biz, M. olarak zayıflatılmış bir suş için protokol tanımlamışlardır patojen 9 in vivo büyüme için kritik olan iki lokus, panCD ve RD1, silinmek ile tüberküloz, mc 2 7000,. Bu şekil değiştirme güvenle ve böylece pahalı bir BSL-3 tesisinin ihtiyacı kaçınarak tuberculosis patojenin temel biyolojisi anlamak için bir BSL-2 çevreleme kullanılabilir. Yöntem diğer kültürleştirilebilir mikobakteriyel türlerin biyofilm büyümeye, medya uygun modifikasyon ile uzatılabilir.
Genel olarak, kültür mikobakteriyel biyofilm yeknesak bir protokol mikobakteri temel esnek özellikleri eğitim ile ilgilenen araştırmacılara yardımcı olacaktır. Ayrıca, büyüyen mikobakteriyel biyofilmlerin açık ve özlü bir yöntem de, klinik ve ilaç inv yardımcı olacaktırestigators potansiyel bir ilacın etkinliğinin test etmek için.
Mycobacterium tuberculosis enfeksiyonu nedeniyle tüberküloz (TB), küresel halk sağlığı için büyük bir tehdit olmaya devam etmektedir. Dünya nüfusunun yaklaşık üçte biri asemptomatik patojen ile enfekte olduğu tahmin edilmektedir, 9 milyon yeni vaka aktif verem ve enfeksiyonun yaklaşık 1,7 milyon kalıp her yıl 11 belirtileri ile her yıl klinikte göstermek. Hastalık büyük bir yük öncelikle bir aşı ve altı ile dokuz ay boyunca uygulanan bir ilaca rejimi içeren bir derece …
The authors have nothing to disclose.
İş Sağlığı ve Amerikan Akciğer Derneği Ulusal Enstitüsü'nün mali desteği ile gerçekleştirilmiştir.
Equipment and supplies | SUPPLIER | CATALOG NUMBER |
Incubator | VWR | Model # 1923/25 |
Polystyrene culture bottles | Fisher Scientific | 03-374-300 |
12-well tissue culture plate | VWR | 62406-165 |
50-mL conical tubes | VWR | 89039-660 |
Rocker | Thermo Scientific | 57019-662 |
Chromatographic refrigerator | VWR | 55702-520 |
petri dish | VWR | 25384-342 |
REAGENT | SUPPLIER | CATALOG NUMBER |
KH2PO4 (monobasic) | EMD | PX1565-1 |
MgSO4 | Fisher | M65-500 |
L-asparagine | Sigma | A4284-100G |
citric acid | Sigma | C1857-100G |
ferric ammonium citrate | Sigma | F5879-100G |
glycerol | EMD | GX0185-5 |
NaOH | Sigma | S8045-500G |
ZnSO4 | Sigma | Z4750-500G |
D-pantothenic acid | Sigma | P2250-25G |
Difco Middlebrook 7H9 Broth | Becton Dickinson | 271310 |
Middlebrook OADC Enrichment | BBL | 212351 |
Tween-80 | Fisher | T164-500 |
250mL storage bottle | Corning | 430281 |
12 well plates | Falcon (BD) | 353043 |
rifampicin | Sigma | R3501-1G |
methanol | J.T. Baker | 9070-05 |
10mlLsyringe | Becton Dickinson | 301604 |
1-200μL pipet tips | VWR | 89079-458 |
parafilm M | VWR | PM-996 |
15mL centrifuge tube | Greiner Bio-One | 188-285 |
Difco Mycobacteria 7H11 Agar | Becton Dickinson | 283810 |
NaCl | Fisher | BP358-1 |
KCl | Sigma | P9333-500G |
Na2HPO4 (dibasic) | Sigma | S0876-500G |