Indução de enxerto-versus-hospedeiro de Doenças e<em> Em Vivo</em> Monitoramento celular T Usando um modelo murino de MHC de correspondência
Summary
O transplante de medula óssea murina é uma técnica amplamente utilizada para estudar os mecanismos imunológicos que regem enxerto-versus-hospedeiro da doença em seres humanos. A capacidade de monitorar padrões de tráfico de células T<em> In vivo</em> Permite a análise detalhada do desenvolvimento e perpetuação da resposta das células T durante a reacção do enxerto contra o hospedeiro da doença.
Abstract
Enxerto-versus-hospedeiro (GVHD) é a barreira limitante à ampla utilização de transplante de medula óssea como uma terapia curativa para uma variedade de deficiências hematológicas. GVHD é causada por células T maduras alorreactivas presentes no enxerto de medula óssea que são infundidas no receptor e causar danos aos órgãos de acolhimento. No entanto, em ratinhos, as células T deve ser adicionado ao inoculo de medula óssea para causar GVHD. Apesar de extenso trabalho tem sido feito para caracterizar células T após o transplante respostas, bioluminescente tecnologia de imagem é um método não-invasivo para monitorar padrões de tráfico de células T in vivo.
Após irradiação letal, ratinhos receptores foram transplantados com células de medula óssea e de esplenócitos de ratinhos dadores. Subconjuntos de células T a partir de L2G85.B6 (ratinhos transgénicos que expressam constitutivamente luciferase) estão incluídos no transplante. Por apenas transplantar certos subgrupos de células T, um é capaz de rastrear específicas subpopulações de células T in vivo,e com base na sua localização, desenvolver hipóteses sobre o papel das subpopulações de células T específicas para a promoção GVHD em vários pontos temporais. No transplante predeterminado intervalos post, ratos receptores são fotografada usando um Xenogen IVIS câmera CCD. A intensidade da luz pode ser quantificado usando software imagem viva para gerar uma imagem pseudo-cor com base na intensidade de fótons (vermelho = intensidade alta, violeta = intensidade baixa).
Entre 4-7 dias após o transplante, os ratos receptores começam a apresentar sinais clínicos da GVHD. Cooke et al. 1 desenvolveu um sistema de pontuação para quantificar a progressão da doença com base na textura da pele destinatário ratos, a integridade da pele, atividade, perda de peso e postura. Os ratinhos são marcados diariamente, e sacrificados quando se tornam moribundo. Ratinhos receptores tornam-se geralmente moribundo 20-30 pós-transplante dias.
Modelos murinos são ferramentas valiosas para o estudo da imunologia da GVHD. Seletivamente transplante especial de células T subconjuntos almínimos para identificação cuidadosa dos papéis de cada subconjunto joga. De forma não invasiva de rastreamento respostas de células T in vivo adiciona outra camada de valor para modelos murinos de GVHD.
Protocol
Discussion
O protocolo para a indução de GVHD em ratinhos apresentados aqui representa um modelo clinicamente relevante da GVHD de murino. Originalmente criado por Berger et al., Em 1994, o C57Bl / 6 em BALB.B combinação estirpe é MHC-combinado, com mortalidade DECH mediada por CD4, CD8 dependentes efetores T 2, altamente semelhantes ao cenário clínico mais comum 3. Sabe-se que o transplante de células T CD8 sozinho não causar GVHD neste modelo, no entanto, a progressão da doença é signif…
Disclosures
The authors have nothing to disclose.
Acknowledgements
Somos gratos a Alice Gaughan e Jiao Wang Jing-cujo saldo suporte técnico, contribuição intelectual, e apoio moral foram fundamentais para mover esses estudos à frente. Estes estudos foram apoiados pela concessão NIH AI036532 para GAH.
Materials
| Name of Reagent | Company | Catalogue Number | Comments |
| RPMI 1640 | Invitrogen | 12633-012 | |
| Fetal Calf Serum | Invitrogen | 10439016 | |
| 40 μM Cell Strainer | BD Biosciences | 352340 | |
| CD3e-Biotin | Miltenyi Biotech | 130-093-021 | |
| Anti-Biotin Microbeads | Miltenyi Biotech | 130-091-147 | |
| CD8a Microbeads | Miltenyi Biotech | 130-049-401 | Used to deplete CD8 T cells from spleen. |
| CD8a Purification Antibody Cocktail | Miltenyi Biotech | 130-095-236 | Used to purify CD8 T cells from spleen. |
| D-Luciferin | Caliper Life Sciences | 122796 |
References
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