L'induction de la réaction du greffon contre l'hôte et des maladies<em> In Vivo</em> Suivi des lymphocytes T utilisant un modèle murin MHC-apparié
Summary
Murin de transplantation de moelle osseuse est une technique largement utilisée pour étudier les mécanismes immunologiques qui régissent la réaction du greffon contre l'hôte chez l'homme. La capacité de surveiller les tendances du trafic de cellules T<em> In vivo</em> Permet une analyse détaillée de l'évolution et de la perpétuation de la réponse des lymphocytes T au cours de la réaction du greffon contre l'hôte.
Abstract
La réaction du greffon contre l'hôte (GVHD) est la barrière limitant l'utilisation à grande échelle de la greffe de moelle osseuse comme traitement curatif pour une variété de déficiences hématologiques. GVHD est causée par les cellules T matures alloréactifs présents dans la greffe de moelle osseuse qui sont infusés dans le récipient et causer des dommages aux organes accueil. Cependant, chez la souris, les cellules T doivent être ajoutés à l'inoculum de moelle osseuse pour provoquer une GVHD. Bien que le travail considérable a été fait pour caractériser T post-transplantation de cellules réponses, la technologie d'imagerie bioluminescente est une méthode non-invasive pour surveiller les habitudes de trafic de cellules T in vivo.
Après irradiation létale, les souris receveuses sont transplantés avec des cellules de moelle osseuse et des splénocytes de souris donneuses. Sous-ensembles de cellules T à partir de L2G85.B6 (souris transgéniques qui expriment de manière constitutive luciférase) sont inclus dans la greffe. En seulement certains sous-ensembles de transplantation de cellules T, on est capable de suivre les sous-ensembles spécifiques de lymphocytes T in vivo,et en fonction de leur emplacement, de formuler des hypothèses concernant le rôle des sous-ensembles spécifiques de lymphocytes T dans la promotion de GVHD à divers moments. À intervalles prédéterminés après la greffe, les souris receveuses sont imagées par un Xenogen IVIS caméra CCD. L'intensité lumineuse peut être quantifiée à l'aide du logiciel d'image de séjour pour générer une image pseudo-couleur sur la base de l'intensité des photons (rouge = forte intensité, violet = faible intensité).
Entre 4-7 après la greffe jours, les souris receveuses commencent à montrer des signes cliniques de GVHD. Cooke et al. 1 développé un système de notation pour quantifier la progression de la maladie basée sur la texture de la fourrure destinataire souris, intégrité de la peau, l'activité, la perte de poids, et la posture. Les souris sont notés tous les jours, et euthanasiés quand ils deviennent moribonds. Les souris receveuses généralement devenue moribonde après la greffe 20-30 jours.
Les modèles murins sont des outils précieux pour l'étude de l'immunologie de la GVHD. Sélective transplantation particulier des cellules T sous-ensembles albas pour une identification précise des rôles joue chaque sous-ensemble. De façon non invasive le suivi des réponses des lymphocytes T in vivo ajoute une autre couche de la valeur à des modèles murins GVHD.
Protocol
Discussion
Le protocole pour induire une GVHD chez les souris présentées ici représente un modèle cliniquement pertinente de la GVH murine. Initialement créé par Berger et al., En 1994, les souris C57BL / 6 en combinaison souche BALB.B est MHC-appariés, avec une mortalité GVHD médiée par CD4, CD8 effecteurs dépendants T 2, très similaires au scénario clinique la plus commune 3. Il est connu que la transplantation des cellules T CD8 ne suffit pas à provoquer une GVHD dans ce modèle, mai…
Disclosures
The authors have nothing to disclose.
Acknowledgements
Nous sommes redevables à Alice Gaughan et Jiao-Jing Wang dont l'encours de soutien technique, l'apport intellectuel et le soutien moral ont contribué à faire progresser ces études à venir. Ces études ont été soutenues par le AI036532 NIH pour GAH.
Materials
| Name of Reagent | Company | Catalogue Number | Comments |
| RPMI 1640 | Invitrogen | 12633-012 | |
| Fetal Calf Serum | Invitrogen | 10439016 | |
| 40 μM Cell Strainer | BD Biosciences | 352340 | |
| CD3e-Biotin | Miltenyi Biotech | 130-093-021 | |
| Anti-Biotin Microbeads | Miltenyi Biotech | 130-091-147 | |
| CD8a Microbeads | Miltenyi Biotech | 130-049-401 | Used to deplete CD8 T cells from spleen. |
| CD8a Purification Antibody Cocktail | Miltenyi Biotech | 130-095-236 | Used to purify CD8 T cells from spleen. |
| D-Luciferin | Caliper Life Sciences | 122796 |
References
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