小鼠肺树突状细胞的分离
Summary
描述一个高度纯化的小鼠肺树突状细胞的准备。具体的重点是给传统的树突状细胞亚群的隔离。
Abstract
龙树突状细胞（DC）感应入侵的病原体1,2以及耐受性反应的控制呼吸道发挥基础性作用。肺癌树突状细胞至少有三个主要的子集已在小鼠描述：传统的直流（CDC）4，浆DC（PDC）和生产干扰素的杀手DC（IKDC） 6,7。 CDC的一个子集，是最突出的DC在肺癌 8的子集。
已知识别DC亚群的共同标记的CD11c，I型跨膜整合（β2），也是在单核细胞，巨噬细胞，中性粒细胞和一些B细胞9表达。在一些组织中，作为一个标记，以识别鼠标DC表面CD11c是有效的，在脾，其中大部分表面CD11c +细胞代表CDC的子集，它表达的主要组织相容性复合体Ⅱ类（MHC -Ⅱ ）的高层次。然而，肺组织的地方是一个更异构端DC亚群，是一个不同的细胞群的比例较高，表示回合MHC -Ⅱ水平低的CD11c高水平。的CD11c 您好 MHC -Ⅱ 老龙的细胞群，根据其特性和大多是其表达F4/80，脾巨噬细胞标记，已被确定为10日和最近肺巨噬细胞，作为一个潜在的DC 前体11。
相比之下鼠标PDC，在肺部的免疫反应的疾病预防控制中心的具体作用的研究一直局限于由于缺乏一个特定的标记，在这些细胞的分离，可以帮助。因此，在这项工作中，我们描述了一个过程来分离高纯度的小鼠肺疾病预防控制中心。隔离肺的DC亚群代表一个非常有用的工具，以获得深入了解这些细胞的功能，在应对呼吸道病原体以及环境因素可以触发主机在肺部的免疫反应。
Protocol
Discussion
肺鼠标直流隔离的呼吸道刺激广泛的研究的一个重要的技术。取得这些细胞的过程中，包括防止损失的细胞以及细胞活力和纯度的关键步骤。肺灌流前收集将有助于消除任何周围细胞以及减少污染物的红细胞。使用自动分解，可当处理大量的肺部advanteogus，否则，你可以选择的替代协议，牢记分散胶原酶消化后的组织应该做的，轻轻的时候手动完成。胶原酶溶液中的肺组织的潜伏期，而不应超出?…
Disclosures
The authors have nothing to disclose.
Acknowledgements
作者想对她的帮助与细胞分选和彼得莫特拉姆在路易斯安那州立大学流式细胞仪核心设施，协助他与显微感谢玛丽莲迪特里希。这项工作是由乘务员医学研究所，路易斯安那州立大学的竞争的研究计划奖，以及美国国立卫生研究院/ NIAID的资助P20 RR020159和R03AI081171。
Materials
| Name of the reagent | Company | Catalogue number | Comments (optional) |
| ACK lysing buffer | Invitrogen | D6-0005DG | |
| Anti-mouse CD11c (HL3) | BD Pharmingen | 5580979 | PE-Cy7 conjugated |
| Anti-mouse I-A/I-E (269) | BD-Pharmingen | 553623 | FITC conjugated |
| Collangenase Type 1A | Sigma | 9891-500MG | |
| Cell strainers | BD Falcon | 352340, 352360 | |
| CD11c (N418) Microbeads | Miltenyi | 130-052-001 | |
| DNase I | Sigma | D5025-150KU | |
| Hank’s Balanced Salt solution | Invitrogen | 14170 | |
| Hepes buffer solution | Invitrogen | 15630 | |
| Petri dishes 60 mm | BD Falcon | 351016 | |
| GentleMACS™ C tubes | Miltenyi | 130-093-237 | |
| Gentle MACS dissociator | Miltentyi | 130-093-235 | |
| AutoMACS-Pro™ | Miltenyi | 130-092-545 | |
| FASCS Aria | BD |
References
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