عزل خلايا الرئة ماوس شجيرى
Summary
يوصف مستحضر عالي النقاء من الخلايا الجذعية الماوس الرئة. ويولى اهتمام محدد لعزل الخلايا الجذعية التقليدية فرعية.
Abstract
الخلايا الجذعية الرئة (DC) تلعب دورا أساسيا في مجال الاستشعار عن غزو الجراثيم ، فضلا عن 1،2 في السيطرة على ردود مولد للتحمل 3 في الجهاز التنفسي. وقد وصفت ما لا يقل عن ثلاث مجموعات فرعية من الخلايا الجذعية الرئيسية الرئة في الفئران : DC التقليدية (CDC) 4 ، بلازماوية DC (PDC) (5) وإنتاج الإنترفيرون العاصمة القاتل (IKDC) 6،7. مجموعة فرعية منها هي فرعية العاصمة الأبرز في الرئة 8.
العلامة المشتركة المعروفة لتحديد مجموعات فرعية هي العاصمة CD11c ، وهو النوع الأول إنتغرين عبر الغشاء (β2) الذي أعرب أيضا عن حيدات ، الضامة ، العدلات وبعض الخلايا باء 9. في بعض الأنسجة ، وذلك باستخدام CD11c كعلامة لتحديد الماوس العاصمة غير صالحة ، كما هو الحال في الطحال ، حيث ان معظم الخلايا + CD11c تمثل مجموعة فرعية منها التي تعبر عن مستويات عالية من التوافق النسيجي الرئيسي الثاني فئة المعقدة (MHC – II). ومع ذلك ، فإن سرطان الرئة هو أكثر الأنسجة المتجانسة حيث تكونالجانب فرعية العاصمة ، وهناك نسبة عالية من السكان الخلايا المتميزة التي تعبر عن مستويات عالية من CD11c نوبة انخفاض مستويات MHC – II. استنادا إلى توصيف ومعظمها على التعبير عن F4/80 ، علامة بلعم الطحال ، وقد تم تحديد مرحبا CD11c الرئة لو MHC – II سكان الخلية كما الضامة الرئوي (10) وأكثر في الآونة الأخيرة ، تمهيدا العاصمة المحتملة 11.
على النقيض من PDC الماوس ، اقتصر على دراسة الدور المحدد للمركز السيطرة على الأمراض في استجابة مناعية الرئوي نظرا لعدم وجود علامة معينة يمكن أن تساعد في عزل هذه الخلايا. لذا ، في هذا العمل ، ونحن تصف الإجراء لعزل عالي النقاء الماوس الرئة CDC. عزل مجموعات فرعية العاصمة الرئوي يمثل أداة مفيدة جدا للحصول على نظرة ثاقبة وظيفة هذه الخلايا في الاستجابة لمسببات الأمراض التنفسية فضلا عن العوامل البيئية التي يمكن أن تؤدي إلى استجابة المضيف المناعية في الرئة.
Protocol
Discussion
عزل العاصمة الماوس الرئوية هي تقنية هامة لدراسة طائفة واسعة من المحفزات في الجهاز التنفسي. عملية الحصول على هذه الخلايا وتشمل الخطوات الحاسمة التي تمنع فقدان الخلايا وكذلك بقاء الخلية والنقاء. سوف Perfusing الرئة قبل جمع مساعدة للقضاء على أي خلايا المحيطية وكذلك الحد من…
Disclosures
The authors have nothing to disclose.
Acknowledgements
فإن الكتاب أود أن أشكر لمارلين ديتريش في مرفق التدفق الخلوي LSU الأساسية لمساعدتها على فرز الخلايا وموترام بيتر لمساعدته مع microphotographs. وقد تم تمويل هذا العمل من قبل معهد الطيران المصاحبة للبحوث الطبية ، وبرنامج بحوث LSU جائزة للمنافسة ، ومنح المعاهد الوطنية للصحة / NIAID P20 RR020159 وR03AI081171.
Materials
| Name of the reagent | Company | Catalogue number | Comments (optional) |
| ACK lysing buffer | Invitrogen | D6-0005DG | |
| Anti-mouse CD11c (HL3) | BD Pharmingen | 5580979 | PE-Cy7 conjugated |
| Anti-mouse I-A/I-E (269) | BD-Pharmingen | 553623 | FITC conjugated |
| Collangenase Type 1A | Sigma | 9891-500MG | |
| Cell strainers | BD Falcon | 352340, 352360 | |
| CD11c (N418) Microbeads | Miltenyi | 130-052-001 | |
| DNase I | Sigma | D5025-150KU | |
| Hank’s Balanced Salt solution | Invitrogen | 14170 | |
| Hepes buffer solution | Invitrogen | 15630 | |
| Petri dishes 60 mm | BD Falcon | 351016 | |
| GentleMACS™ C tubes | Miltenyi | 130-093-237 | |
| Gentle MACS dissociator | Miltentyi | 130-093-235 | |
| AutoMACS-Pro™ | Miltenyi | 130-092-545 | |
| FASCS Aria | BD |
References
- Pulendran, B., Palucka, K., Banchereau, J. Sensing pathogens and tuning immune responses. Science. 293, 253-256 (2001).
- Banchereau, J. Immunobiology of dendritic cells. Annual Review of Immunology. 18, 767-811 (2000).
- Manicassamy, S., Pulendran, B. Dendritic cell control of tolerogenic responses. Immunol. Rev. 241, 206-227 (2011).
- Steinman, R. M., Cohn, Z. A. Identification of a novel cell type in peripheral lymphoid organs of mice. I. Morphology, quantitation, tissue distribution. J. Exp. Med. 137, 1142-1162 (1973).
- Asselin-Paturel, C. Mouse type I IFN-producing cells are immature APCs with plasmacytoid morphology. Nat. Immunol. 2, 1144-1150 (2001).
- Chan, C. W. Interferon-producing killer dendritic cells provide a link between innate and adaptive immunity. Nat. Med. 12, 207-213 (2006).
- Taieb, J. A novel dendritic cell subset involved in tumor immunosurveillance. Nat. Med. 12, 214-219 (2006).
- Guerrero-Plata, A., Kolli, D., Hong, C., Casola, A., Garofalo, R. P. Subversion of pulmonary dendritic cell function by paramyxovirus infections. Journal of Immunology. 182, 3072-3083 (2009).
- Larson, R. S., Springer, T. A. Structure and function of leukocyte integrins. Immunol. Rev. 114, 181-217 (1990).
- Sung, S. S. A major lung CD103 (alphaE)-beta7 integrin-positive epithelial dendritic cell population expressing Langerin and tight junction proteins. J. Immunol. 176, 2161-2172 (2006).
- Wang, H. Local CD11c+ MHC class II- precursors generate lung dendritic cells during respiratory viral infection, but are depleted in the process. J. Immunol. 177, 2536-2542 (2006).
- Bhatia, S. Rapid host defense against Aspergillus fumigatus involves alveolar macrophages with a predominance of alternatively activated phenotype. PLoS One. 6, e15943-e15943 (2011).
- Shao, Z., Makinde, T. O., McGee, H. S., Wang, X., Agrawal, D. K. Fms-like tyrosine kinase 3 ligand regulates migratory pattern and antigen uptake of lung dendritic cell subsets in a murine model of allergic airway inflammation. J. Immunol. 183, 7531-75381 (2009).
- Hao, X., Kim, T. S., Braciale, T. J. Differential response of respiratory dendritic cell subsets to influenza virus infection. J. Virol. 82, 4908-4919 (2008).
