Fare Akciğer Dendritik Hücrelerinin İzolasyonu
Summary
Fare akciğer dendritik hücreler yüksek oranda saflaştırılmış açıklanmıştır. Özgül ağırlık, geleneksel dendritik hücre alt izolasyon verilir.
Abstract
Akciğer dendritik hücreler (DC), solunum yolu kontrol tolerogenic tepkilerin yanı sıra 3 işgalci patojenlere 1,2 algılama temel bir rol oynar . Farelerde akciğer dendritik hücreler, en az üç ana alt kümelerini tarif edilmiştir: konvansiyonel DC (CDC) 4, plazmasitoid DC (PDC) 5 ve IFN-üreten katil DC (IKDC) 6,7. CDC altkümesi akciğer 8 en önemli DC alt kümesidir.
DC alt kümeleri tanımlamak için bilinen ortak işaretleyici CD11c, tip I monositler, makrofajlar, nötrofiller ve bazı B hücreleri 9 da ifade edilir transmembran integrin (β2). Bazı dokularda, fare DC tanımlamak için bir işaretleyici olarak CD11c kullanarak en CD11c + hücreleri büyük doku uygunluk kompleksi sınıf II (MHC-II) yüksek düzeyde ifade eden CDC alt kümesini temsil eder, dalak, geçerlidir . Ancak, akciğer, bir daha heterojen dokuyan DC alt setlerini, MHC-II düşük seviyelerde dersin CD11c'nin yüksek düzeyde ifade farklı bir hücre popülasyonu yüksek bir yüzdesi vardır. Karakterizasyonu ve çoğunlukla F4/80, dalak makrofaj işaretleyici ifade dayanarak, MHC-II CD11c hi lo akciğer hücre popülasyonu potansiyel bir DC 11 habercisi olarak, pulmoner makrofajlar daha yakın bir zamanda 10 olarak tespit edilmiştir.
Fare PDC aksine, pulmoner immün yanıt CDC belirli rol çalışmada, bu hücrelerin izolasyonunda yardımcı olabilir belirli bir marker eksikliği nedeniyle sınırlı kalmıştır. Bu nedenle, bu çalışmada, yüksek derecede saflaştırılmış fare akciğer CDC izole etmek için bir prosedür açıklar. Pulmoner DC alt gruplarının izolasyon solunum patojenleri akciğer konağın immün yanıtı tetikleyebilecek çevresel faktörlerin yanı sıra tepki olarak bu hücrelerin fonksiyonu içgörüler kazanmak için çok yararlı bir araç temsil eder.
Protocol
Discussion
Pulmoner fare DC İzolasyon solunum uyaranların geniş bir çalışma için önemli bir tekniktir. Bu hücrelerin elde edilmesi sürecinin yanı sıra hücre canlılığı ve saflık hücre kaybı önlemek kritik adımları içerir. Toplama önce akciğer perfüze sıra kirletici eritrositler azaltmak gibi herhangi bir periferik hücrelerini ortadan kaldırmak için yardımcı olacaktır. Akciğerlerin çok sayıda işlenir otomatik disosiasyon advanteogus olabilir, aksi takdirde Elle yapıldığında kollajenaz sindir…
Disclosures
The authors have nothing to disclose.
Acknowledgements
Yazarlar, hücre sıralama ve Peter Mottram microphotographs ile yaptığı yardım için ona yardım için LSU Sitometrisi Core Tesisleri'nde Marilyn Dietrich teşekkür etmek istiyorum. Bu çalışma, Uçuş Görevlisi Tıbbi Araştırma Enstitüsü, LSU-Rekabet Araştırmaları Programı Ödülü ve NIH / NIAID Hibeler P20 RR020159 ve R03AI081171 tarafından finanse edildi.
Materials
| Name of the reagent | Company | Catalogue number | Comments (optional) |
| ACK lysing buffer | Invitrogen | D6-0005DG | |
| Anti-mouse CD11c (HL3) | BD Pharmingen | 5580979 | PE-Cy7 conjugated |
| Anti-mouse I-A/I-E (269) | BD-Pharmingen | 553623 | FITC conjugated |
| Collangenase Type 1A | Sigma | 9891-500MG | |
| Cell strainers | BD Falcon | 352340, 352360 | |
| CD11c (N418) Microbeads | Miltenyi | 130-052-001 | |
| DNase I | Sigma | D5025-150KU | |
| Hank’s Balanced Salt solution | Invitrogen | 14170 | |
| Hepes buffer solution | Invitrogen | 15630 | |
| Petri dishes 60 mm | BD Falcon | 351016 | |
| GentleMACS™ C tubes | Miltenyi | 130-093-237 | |
| Gentle MACS dissociator | Miltentyi | 130-093-235 | |
| AutoMACS-Pro™ | Miltenyi | 130-092-545 | |
| FASCS Aria | BD |
References
- Pulendran, B., Palucka, K., Banchereau, J. Sensing pathogens and tuning immune responses. Science. 293, 253-256 (2001).
- Banchereau, J. Immunobiology of dendritic cells. Annual Review of Immunology. 18, 767-811 (2000).
- Manicassamy, S., Pulendran, B. Dendritic cell control of tolerogenic responses. Immunol. Rev. 241, 206-227 (2011).
- Steinman, R. M., Cohn, Z. A. Identification of a novel cell type in peripheral lymphoid organs of mice. I. Morphology, quantitation, tissue distribution. J. Exp. Med. 137, 1142-1162 (1973).
- Asselin-Paturel, C. Mouse type I IFN-producing cells are immature APCs with plasmacytoid morphology. Nat. Immunol. 2, 1144-1150 (2001).
- Chan, C. W. Interferon-producing killer dendritic cells provide a link between innate and adaptive immunity. Nat. Med. 12, 207-213 (2006).
- Taieb, J. A novel dendritic cell subset involved in tumor immunosurveillance. Nat. Med. 12, 214-219 (2006).
- Guerrero-Plata, A., Kolli, D., Hong, C., Casola, A., Garofalo, R. P. Subversion of pulmonary dendritic cell function by paramyxovirus infections. Journal of Immunology. 182, 3072-3083 (2009).
- Larson, R. S., Springer, T. A. Structure and function of leukocyte integrins. Immunol. Rev. 114, 181-217 (1990).
- Sung, S. S. A major lung CD103 (alphaE)-beta7 integrin-positive epithelial dendritic cell population expressing Langerin and tight junction proteins. J. Immunol. 176, 2161-2172 (2006).
- Wang, H. Local CD11c+ MHC class II- precursors generate lung dendritic cells during respiratory viral infection, but are depleted in the process. J. Immunol. 177, 2536-2542 (2006).
- Bhatia, S. Rapid host defense against Aspergillus fumigatus involves alveolar macrophages with a predominance of alternatively activated phenotype. PLoS One. 6, e15943-e15943 (2011).
- Shao, Z., Makinde, T. O., McGee, H. S., Wang, X., Agrawal, D. K. Fms-like tyrosine kinase 3 ligand regulates migratory pattern and antigen uptake of lung dendritic cell subsets in a murine model of allergic airway inflammation. J. Immunol. 183, 7531-75381 (2009).
- Hao, X., Kim, T. S., Braciale, T. J. Differential response of respiratory dendritic cell subsets to influenza virus infection. J. Virol. 82, 4908-4919 (2008).
