Didermique co-culture de neurones de rat corticale primaire et des cellules gliales

Cette vidéo va vous guider dans le processus de neurones de rat en culture corticaux, en présence d'une couche nourricière gliales, un système connu comme un bilaminaire ou co-culture de modèle. Ce système est approprié pour une variété de besoins expérimentaux nécessitant soit un verre ou de plastique et substrat de croissance peut également être utilisé pour la culture des autres types de neurones.

Neurones corticaux de rat obtenu à partir de la phase tardive embryonnaires (E17) sont étalées sur des lamelles de verre ou de boîtes de culture tissulaire face à une couche nourricière de cellules gliales cultivées sur des lamelles en plastique ou des plats (connu sous le nom Thermanox), respectivement. Le choix entre les deux configurations dépend de la technique expérimentale utilisée spécifiques, qui peuvent exiger, ou non, que les neurones sont cultivés sur le verre (par exemple l'imagerie calcique par rapport Western blot). La couche nourricière gliales, les astrocytes une culture enrichie de cellules gliales secondaires mixtes, est préparé séparément à partir du cortex des ratons nouveau-nés (P2-4) avant le neuronaledissection.

Un avantage majeur de ce système de culture par rapport à une culture de neurones est seulement le soutien de la croissance neuronale, la survie et la différenciation fournies par des facteurs trophiques sécrétés de la couche nourricière gliales, qui ressemble plus précisément l'environnement du cerveau in vivo. Par ailleurs, la co-culture peut être utilisée pour étudier les interactions neuronales-gliales ^1.

Dans le même temps, la contamination glie dans la couche de neurones est empêchée par des moyens différents (culture à faible densité, l'ajout d'inhibiteurs mitotiques, le manque de sérum et de l'utilisation de milieu de culture optimisé) conduisant à une couche pratiquement pure neuronale, comparable à d'autres méthodes établies ^{1 -3.} Les neurones peuvent être facilement séparées de la couche gliales à tout moment pendant la culture et utilisés pour différentes applications allant de l'électrophysiologie expérimentale ^4, biologie cellulaire et moléculaire ^{5-8, 5} biochimie, l'imagerie et le microroscopy ^4,6,7,9,10. Les neurones primaires s'étendent axones et dendrites de former des synapses fonctionnelles ^11, un processus qui n'est pas observée dans les lignées cellulaires neuronales, même si certaines lignées cellulaires ne s'étendent processus.

Un protocole détaillé de neurones de rat en culture hippocampe en utilisant ce système de co-culture a été décrit précédemment ^4,12,13. Ici, nous détaillons un protocole modifié adapté pour les neurones corticaux. Comme environ 20×10 ⁶ cellules sont récupérées à partir de chaque embryon de rat, cette méthode est particulièrement utile pour des expériences nécessitant un grand nombre de neurones (mais pas préoccupé par une population très homogène neuronale). La préparation des neurones et cellules gliales doit être planifiée dans des délais spécifiques. Nous allons fournir le protocole étape par étape pour la culture de neurones de rat corticale ainsi que la culture de cellules gliales pour soutenir les neurones.