Isolierung von Functional Cardiac Immune Cells
Summary
Diese Methode zur Isolierung von funktionellen Immunzellen aus dem Herzen stellt eine Alternative zu den herkömmlichen Methoden der Kollagenaseverdau, die unerwünschten Immun-Zell-Aktivierung verursacht, was zu einer verminderten Reaktionsfähigkeit dieser Zellen. Unsere Methode der Isolierung ergibt funktionelle Herz-Immunzellen durch die Vermeidung von Problemen mit enzymatische Verdauung.
Abstract
Cardiac Immunzellen gewinnen Interesse für die Rollen, die sie spielen in den pathologischen Umbau in vielen Herzerkrankungen 1-5 Diese Immunzellen, die Mastzellen, T-Zellen und Makrophagen gehören,. Speicherung und Freisetzung einer Vielzahl von biologisch aktiven Mediatoren einschließlich Zytokine und Proteasen wie Tryptase. 6-8 Diese Mediatoren haben gezeigt, dass wichtige Akteure in der extrazellulären Matrix Stoffwechsel werden durch die Aktivierung Matrixmetalloproteinasen oder was Kollagenakkumulation durch Modulation der kardialen Fibroblasten-Funktion. 9-11 Allerdings haben verfügbaren Techniken zur Isolierung von Herz-Immunzellen problematisch, weil sie bakterieller Kollagenase, um das Herzmuskelgewebe verdauen verwenden. Diese Technik bewirkt eine Aktivierung der Immunzellen und somit zu einem Verlust der Funktion. Zum Beispiel, kardiale Mastzellen deutlich weniger auf Verbindungen, die Degranulation führen werden. 12 Darum entwickelten wir eine Technik, die für t erlaubtEr Isolation von funktionellen Herz-Immunzellen, die zu einem besseren Verständnis der Rolle dieser Zellen bei Herzerkrankungen führen würde. 13, 14
Diese Methode erfordert eine gewisse Vertrautheit mit der anatomischen Lage der Ratte Xiphoidbasis, Achselhöhle und Lig. falciforme und Perikard des Herzens. Diese Landmarken sind wichtig für den Erfolg des Verfahrens zu erhöhen und eine höhere Ausbeute an Herz-Immunzellen zu gewährleisten. Diese isolierten kardialen Immunzellen können dann für die Charakterisierung der Funktionalität, Erscheinungsbild, Reife und Co-Kultur-Experimente mit anderen Herzzellen zu einem besseren Verständnis ihrer Wechselwirkungen zu gewinnen verwendet werden.
Protocol
Discussion
Dieses Verfahren zur Isolierung von Herz-Immunzellen ermöglicht die Analyse ihrer Funktion, Phänotyp und Reife, ohne die ungewollte Aktivierung, die typischerweise während einer traditionellen enzymatische Verdauung Isolation Technik. Die durchschnittliche Gesamtzahl der Zellen mit dieser Technik erhält man rund 400.000 pro Ratte Herz und Differential-Färbung und Durchflusszytometrie-Analyse dieser Zellen zeigt gemischte Population von T-Lymphozyten (~ 70%), Makrophagen (~ 12%) und Mastzellen mit die Verwendung die…
Disclosures
The authors have nothing to disclose.
Acknowledgements
Diese Arbeit wurde durch ein UNCF-Merck Graduate Science Research Dissertation Fellowship (JLM), National Heart, Lung, and Blood Institute gewährt RO1-HL-62228 (JSJ) und RO1-HL-073990 (JSJ) unterstützt.
Materials
| Name of Reagent and Equipment | Company | Catalogue Number | Comments |
| Hanks’ Balanced Salt | Sigma | H4891 | One bottle makes 1 L of Hanks’ Balance Salt Solution. Reconstitute Hanks’ Balance Salt Solution as a part of the procedure. |
| Antibiotic- Antimyotic | Gibco | 15240-062 | |
| HEPES | Sigma | H3784 | |
| Bovine Serum Albumin | Sigma | A3912 | |
| 250 mL Nalogene Filter Bottle | Thermoscientific | 157-0020 | |
| 12 N HCL | Fisher Scientific | CAS 7647-01-0 | For 6 N, add equal volumes of HCL to deionized water. |
| 10 N NaOH | Fisher Scientific | SC267 | For 5 N, add equal volumes of NaOH to deionized water. |
| Double Distilled Water |
Table of Specific Equipment:
| Name of Reagent and Equipment | Company | Catalogue Number | Comments |
| 3-O Suture Silk Braided | Ethicon Products | SA64H | |
| Small Animal Ventilator | CWE Incorporated | SAR-830 | Set breathing rate to 40.5 breaths per min. |
| Bevel 18 gauge needle | BD Biosciences | 305199 | Trim needle by 1/2 to 3/4 of its original length for use as a tracheal tube. |
| Teflon Tip (with needle removed) of 24-gauge Baxter quick-cath catheter | Baxter | 2N111 | Reduce the Teflon Tip length by 1/2 to 3/4. |
| 10 cc syringe | Fisher Scientific | 14-823-16B | |
| 15 mL Falcon Tubes | BD Biosciences | 352097 | |
| Sorvall RT6000B Refrigerated Centrifuge | Fisher Scientific | 75-004-377 | Remember to pre-cool and keep at 4°C. |
| Hyclone | Thermoscientific | S300030.02 | |
| Hemocytometer | Hausser Scientific | HS-LB-1483 |
References
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