Deze methode voor het isoleren van functionele immuun cellen van het hart biedt een alternatief voor de conventionele methoden van collagenase spijsvertering, die ongewenste immuun-cel activatie veroorzaakt, wat resulteert in een verminderde respons van deze cellen. Onze methode van isolatie levert functionele hart immuuncellen door het vermijden van problemen die samenhangen met enzymatische spijsvertering.
Cardiale immuuncellen worden steeds belangstelling voor de rollen die zij spelen in de pathologische remodeling in veel hartaandoeningen 1-5 Deze immuuncellen, die mestcellen, T-cellen en macrofagen bevatten;. Bewaren en laat een verscheidenheid van biologisch actieve mediators zoals cytokines en proteases zoals tryptase. 6-8 Deze bemiddelaars is aangetoond dat de belangrijkste spelers in de extracellulaire matrix metabolisme worden door het activeren van matrix metalloproteinases of het veroorzaken van collageen accumulatie door het moduleren van de cardiale fibroblasten 'functie. 9-11 echter beschikbare technieken voor het isoleren van het hart immune cellen is problematisch omdat ze bacterieel collagenase om de myocardweefsel verteren. Deze techniek zorgt voor de activatie van het immuunsysteem cellen en dus een verlies van functie. Bijvoorbeeld, cardiale mestcellen worden aanzienlijk minder reageren op stoffen die degranulatie kunnen veroorzaken. Daarom 12, hebben we een techniek ontwikkeld die het mogelijk maakt voor tHij isolatie van functionele hart immune cellen, die zou leiden tot een beter begrip van de rol van deze cellen in hart-en vaatziekten. 13, 14
Deze methode vereist een vertrouwdheid met de anatomische locatie van zwaardvormig de rat het proces, oksel en gebogen ligament, en hartzakje van het hart. Deze monumenten zijn belangrijk voor het succes van de procedure te verhogen en een hogere opbrengst van de cardiale immune cellen te verzekeren. Deze geïsoleerde hart immune cellen kunnen vervolgens worden gebruikt voor de karakterisering van functionaliteit, fenotype, volwassenheid en co-cultuur experimenten met andere hartcellen tot een beter begrip van hun interacties te krijgen.
Deze methode van isoleren van cardiale immuuncellen maakt de analyse van hun functie, fenotype, en volwassenheid zonder de ongewenste activering die normaal gesproken optreedt tijdens een traditionele enzymatische vertering isolatie techniek. De gemiddelde totale aantal cellen verkregen met deze techniek is ongeveer 400.000 per rat hart, en differentiële kleuring en flowcytometrie-analyse van deze cellen geeft aan gemengde populatie van T-lymfocyten (~ 70%), macrofagen (~ 12%) en mast cellen met het gebruik van deze te…
The authors have nothing to disclose.
Dit werk werd ondersteund door een UNCF-Merck Graduate Wetenschappelijk Onderzoek Proefschrift Fellowship (JLM), National Heart, Lung, and Blood Institute beurzen RO1-HL-62228 (JSJ) en RO1-HL-073990 (JSJ).
Name of Reagent and Equipment | Company | Catalogue Number | Comments |
Hanks’ Balanced Salt | Sigma | H4891 | One bottle makes 1 L of Hanks’ Balance Salt Solution. Reconstitute Hanks’ Balance Salt Solution as a part of the procedure. |
Antibiotic- Antimyotic | Gibco | 15240-062 | |
HEPES | Sigma | H3784 | |
Bovine Serum Albumin | Sigma | A3912 | |
250 mL Nalogene Filter Bottle | Thermoscientific | 157-0020 | |
12 N HCL | Fisher Scientific | CAS 7647-01-0 | For 6 N, add equal volumes of HCL to deionized water. |
10 N NaOH | Fisher Scientific | SC267 | For 5 N, add equal volumes of NaOH to deionized water. |
Double Distilled Water |
Table of Specific Equipment:
Name of Reagent and Equipment | Company | Catalogue Number | Comments |
3-O Suture Silk Braided | Ethicon Products | SA64H | |
Small Animal Ventilator | CWE Incorporated | SAR-830 | Set breathing rate to 40.5 breaths per min. |
Bevel 18 gauge needle | BD Biosciences | 305199 | Trim needle by 1/2 to 3/4 of its original length for use as a tracheal tube. |
Teflon Tip (with needle removed) of 24-gauge Baxter quick-cath catheter | Baxter | 2N111 | Reduce the Teflon Tip length by 1/2 to 3/4. |
10 cc syringe | Fisher Scientific | 14-823-16B | |
15 mL Falcon Tubes | BD Biosciences | 352097 | |
Sorvall RT6000B Refrigerated Centrifuge | Fisher Scientific | 75-004-377 | Remember to pre-cool and keep at 4°C. |
Hyclone | Thermoscientific | S300030.02 | |
Hemocytometer | Hausser Scientific | HS-LB-1483 |