Количественная оценка дцДНК использованием Hitachi F-7000 Флуоресцентный спектрофотометр и PicoGreen Dye
Summary
Демонстрация количественное двухцепочечной ДНК с использованием молекулярных зондов PicoGreen красителя и Hitachi F-7000 флуоресценции Спектрофотометр оснащен аксессуар микропланшетов читателя.
Abstract
Количественная оценка ДНК, особенно в малых концентрациях, является важной задачей с широким спектром биологических приложений, включая стандартные молекулярного анализа биологии, таких как синтеза и очистки ДНК, диагностических приложений, таких как количественная оценка продуктов амплификации ДНК и обнаружение молекул ДНК с наркотиками препаратов. В этом видео мы продемонстрируем возможности Hitachi F-7000 флуоресценции Спектрофотометр оснащен Micro аксессуар чтения пластин для выполнения дцДНК количественного использования молекулярных проб Квант-это PicoGreen красителя реагентов.
F-7000 флуоресценции Спектрофотометр обладает высокой чувствительностью и высоким измерения скорости. Это очень гибкая система, способная измерения флуоресценции, люминесценции и фосфоресценции. Несколько режимов измерений доступны, в том числе длина волны сканирования, время сканирования, фотометрии и 3-D сканирования измерения. Спектрофотометр имеет чувствительность в диапазоне от 50 пикомолей флуоресцеина при использовании 300 мкл объем образца в планшет, и может измерять скорость сканирования 60000 нм / мин. Она также имеет широкий динамический диапазон до 5 порядков, которая позволяет использовать калибровочных кривых в широком диапазоне концентраций. Оптическая система использует все отражающей оптика для максимальной энергии и чувствительности. Стандартный диапазон длин волн от 200 до 750 нм, и может быть расширен до 900 нм при использовании одного из дополнительных ближней инфракрасной фотоумножителей. Система позволяет дополнительно контролировать температуру ридер с 5 до 60 градусов Цельсия с помощью дополнительного внешнего температуры контролируемой жидкости циркулятор. Микропланшетов читателя позволяет использовать 96-а микропланшетов и измерения скорости на 96 лунок составляет менее 60 секунд при использовании режима кинетики.
Программное обеспечение управления для F-7000 и Считыватель микропланшетов также высокой гибкостью. Пробы могут быть установлены либо в столбце или строке форматов, а также любое сочетание скважин могут быть выбраны для выборочных измерений. Это позволяет оптимально использовать планшет. Кроме того, программное обеспечение позволяет импортировать микро образец стекла конфигураций созданных в Excel и сохранить в значения, разделенные запятыми, или "CSV" формат. Микропланшетов измерения конфигурации могут быть сохранены и восстановлены на программное обеспечение для удобства и повышения производительности. Данные результаты могут быть выведены на стандартный отчет, в Excel, или дополнительный Программа генератор отчетов.
Protocol
Discussion
Тщательное пипетки во время подготовки проб, а также с помощью стабильной и чувствительной флуоресценции спектрофотометр имеет важное значение для получения хороших и воспроизводимые результаты.
В случае флуоресценции использовали спектрофотометр для этого теста, он предложил использовать 300 мкл конечного объема выборки в микропланшетного. Нижний объем уменьшается чувствительность, и большего объема может привести к перекрестного загрязнения между скважинами.
Disclosures
The authors have nothing to disclose.
Materials
| Material Name | Type | Company | Catalogue Number | Comment |
|---|---|---|---|---|
| Distilled H2O | Reagent | |||
| Quant-iT Picogreen dsDNA Assay Kit from Invitrogen | Reagent | P7589 | ||
| Nalge Nunc Fluorescence Microplates p/n 237108 | Supply | 237108 | ||
| 12 Channel Eppendorf Micropipette | Supply | 3516677 | ||
| 1000 μL Eppendorf Pipette | Supply | |||
| 200 μL Eppendorf Pipette | Supply | |||
| 10 mL serological pipet | Supply | |||
| Aluminum foil | Supply | |||
| Pipette tips | Supply | |||
| Hitachi F-7000 Fluorescence Spectrophotometer with FL Solutions 2.1 | Equipment | 5J1-0003 | ||
| Microplate Reader Accessory for F-7000 | Equipment | 5J0-0139 |
References
- Singer, V. L., Jones, L. J., Yue, S. T., Haugland, R. P. Characterization of PicoGreen reagent and development of a fluorescence-based solution assay for double-stranded DNA quantitation. Analytical Biochemistry. 249 (2), 228-238 (1997).
