Summary

抗原特異的インビボでのキリングアッセイ

Published: November 09, 2010
doi:

Summary

多くの感染症は、強力なCTL応答を誘発するが、時折、応答する細胞の量は、病原体の制御に相関しない<sup> 1</sup>。 CTLの質の1つの尺度は具体的に死滅させる能力です。<sup> 2</sup>。標的細胞のCFSE標識は、このCTL応答の品質を調査するために使用することができます<em> in vivoで</em<sup> 3,4</sup>。

Abstract

カルボキシフルオレセインジアセテートスクシンイミジルエステル(CFSE)を容易かつ迅速に生体内での調査ための関心の細胞集団を標識するために使用することができます。この標識は、古典的な増殖と移動を研究するために使用されています。ここで紹介した方法では、我々は、エピトープの特定のCFSE標識した標的細胞を4-6の生存と殺害を見に養子移入した後にタイムラインを短縮している。その量は、誤解を招く可能性があるとしてCD8 + T細胞クローンの特定の殺害のレベルは、応答の質を示すことができます。特定のCD8 + T細胞はサイトカイン産生と7,8を殺すの低下と時間をかけて機能的に枯渇することができます。また、特定のCD8 + T細胞クローンは、異なるTCRの特異性9と同様に他人を殺すしないことがあります。効果的な細胞性免疫(CMI)の場合、抗原はT細胞の応答の適切な数字だけでなく、機能的に堅牢な応答性T細胞だけを作り出すことを識別する必要があります。ここでは、BALB / cマウスに2つのペプチド特異的T細胞クローンのパーセントの細胞特異的殺傷を評価する。

Protocol

1。予防接種によってターゲット固有のエフェクターCTLを誘発する(0日) ターゲットシステム:開始する前に、特定のエフェクターを決定するとき。 in vivoで CTLアッセイにおける古典のこの例では、我々は特異的CD8 + T細胞を誘発するために精製されたペプチドの予防接種を使用します。ターゲットシステム:同ペプチドは特定のエフェクターを作成し、同系の標的細胞?…

Discussion

CFSEは子孫10,11の間で比較的均等に分割するので、このアッセイは、クローン性増殖を含む細胞の増殖能を調査するように変更することができます。また、CFSE標識と組み合わせることができる例の四量体および生物発光13あなたの仮説に応じてより適切な方法をトレースし、他のセルが、、ありますがそれは、細胞遊走6,12を調査するためにラベル付けCFSEを使用するこ?…

Disclosures

The authors have nothing to disclose.

Acknowledgements

私は免疫学的アッセイやマウス操作に私を導入するためビアンカMOTHE、カルラOseroff、とマリー=フランスDelGuercioに感謝したいと思います。 GAスプリッタのラボでの作業は、NIHの助成金1 – RO1 – AI – 073558、GLRCE助成1 – U54 – AI – 057153、およびBARD US – 3829から06によって運営されている。

Materials

Material Name Type Company Catalogue Number Comment
1 mm glass beads   Biospec Products 11079110  
70 μm cell strainer   BD Falcon 352350  
96-well plate   Costar 3799  
Adjulite Incomplete Freund’s Adjuvant   Pacific Immunology n/a  
DMSO   Sigma D-5879  
FBS   GIBCO 16000-077  
FC 500 Flow Cytometer   Beckman Coulter n/a  
Kontes glass tissue grinder   Kontes 885300-0015  
Mini Beadbeater   Biospec Products n/a  
Needle   B-D 305175  
Parafilm “M”   Pechiney Plastic Packaging PM992  
Paraformaldehyde   Electron Microscopy Sciences 157-8  
PBS   GIBCO 10010-023  
PharmLyse lysing reagent   BD Biosciences 555899  
RPMI 1640   GIBCO 11875-093  
Syringe   B-D 309602  
Vybrant CFSE Kit   Invitrogen (Molecular Probes) V12883  

References

  1. Blattman, J. N., Wherry, E. J., Ha, S. J., van der Most, R. G., Ahmed, R. Impact of epitope escape on PD-1 expression and CD8 T-cell exhaustion during chronic infection. J Virol. 83 (9), 4386-4394 (2009).
  2. Jenkins, M. R., Tsun, A., Stinchcombe, J. C., Griffiths, G. M. The strength of T cell receptor signal controls the polarization of cytotoxic machinery to the immunological synapse. Immunity. 31 (4), 621-631 (2009).
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Cite This Article
Durward, M., Harms, J., Splitter, G. Antigen Specific In Vivo Killing Assay using CFSE Labeled Target Cells. J. Vis. Exp. (45), e2250, doi:10.3791/2250 (2010).

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