داخل القحف حقن الغدة المرتبطة ناقلات فيروسية
Summary
هنا نقدم الحقن داخل القحف ناقلات AAV لوصفها الفلورسنت من الخلايا العصبية والدبقية في القشرة البصرية.
Abstract
الحقن داخل القحف ناقلات فيروسية هندسيا للتعبير عن بروتين فلوري هو أسلوب متعدد الأغراض لوسم التصور من مجموعات فرعية معينة من الخلايا في مناطق الدماغ المختلفة سواء في الجسم الحي وأقسام الدماغ. خلافا لحقن الأصباغ الفلورية ، ووضع العلامات الفيروسية عروض استهداف أنواع الخلايا الفردية وأقل تكلفة وتستغرق وقتا طويلا من إنشاء خطوط الفأر المعدل وراثيا. في هذه التقنية ، يتم حقن الغدة المرتبطة الفيروسي (AAV) المتجه باستخدام إحداثيات intracranially التجسيمي ، micropipette ألف ومضخة آلية لتسليم الدقيق للAAV إلى المنطقة المرجوة بأقل ضرر في الأنسجة المحيطة. ويمكن تكييف المعلمات حقن للتجارب الفردية من خلال تعديل سن الحيوانية بمعدل الحقن ، موقع الحقن ، وحجم الحقن ، الحقن ، والمصلي AAV المروج القيادة التعبير الجيني. تبعا للظروف المختار ، يمكن فيروسي بفعل التحوير التعبير التصور تسمح لمجموعات من الخلايا ، والخلايا الفردية أو العمليات الخلوية الجميلة ، وصولا الى مستوى العمود الفقري شجيري. أظهرت التجربة هنا يصور حقنة من المزدوج تقطعت بهم السبل AAV معربا عن بروتين الفلورية الخضراء لوضع العلامات على الخلايا العصبية والدبقية في القشرة البصرية الأولية الماوس.
Protocol
Discussion
فيروسي بوساطة توصيل الجينات يحمل إمكانات كبيرة لدراسة العمليات العصبية وعلاج اضطرابات الدماغ 1،2،3. ويمكن أيضا للتنوع كبير من هذه التقنية يمكن استغلالها لتسمية الخلايا fluorescently التصوير على حد سواء في المختبر والمجراة 4. نحن هنا يبرهن على وجود إجراءات ?…
Disclosures
The authors have nothing to disclose.
Acknowledgements
وقدم هذا العمل ممكن من المنح المقدمة من المعاهد الوطنية للصحة (EY012977) ، وجائزة شهادة في العلوم الطبية الحيوية من صندوق ويلكوم بوروز ، ومؤسسة وايتهول ، ومؤسسة سلون (AKM).
Materials
| Material Name | Type | Company | Catalogue Number | Comment |
|---|---|---|---|---|
| Stoelting Mouse and Neonatal Rat Adaptor | Stoelting | 51625 | Regular stereotax for securing animals for surgery may be substituted | |
| Extra Fine Bonn Scissors, 8.5cm, straight tip, cutting edge 13mm | Fine Science Tools | 14084-08 | ||
| Eye Dressing Forceps, 10cm, tip width 0.5mm, curved | Fine Science Tools | 11152-10 | ||
| Dumont #5/45 Forceps- Dumoxel Standard Tip, 11cm, angled | Fine Science Tools | 11251-35 | Extra-fine tipped forceps for performing craniotomy | |
| Standard Pattern Forceps, straight, 2.5mmx1.35mmtip, 12cm | Fine Science Tools | 11000-12 | ||
| Microtorque Control Box and Tech2000 handpiece | Ram Products, Inc. | TECH2000ON/OFF | Dental drill | |
| Micro Drill Stainless Steel Burrs 1.4mm tip diameter | Fine Science Tools | 19008-14 | ||
| Wiretrol micropipettes, to deliver 1-5 Ul | VWR International/ Drummond | 5-000-1001 or 53480-287 | ||
| Mineral oil | VWR International | 29447-338 | ||
| Manual Micromanipulator and Tilting Base (right-handed) | World Precision Instruments, Inc. | M3301-M3-R | Used for determining stereotaxic co-ordinates | |
| UltraMicroPump (UMP3) (one) with SYS-Micro4 Controller | World Precision Instruments, Inc. | UMP3-1 | ||
| Sutures | VWR International | 95056-952 | ||
| P-97 Flaming/Brown Micropipette Puller | Sutter Instruments | P-97 | ||
| Tobradex | Available from your institution’s veterinary services |
References
- Kaplitt, M. G., Leone, P., Samulski, R. J., Xiao, X., Pfaff, D. W., O’Malley, K. L., During, M. J. Long-term gene expression and phenotypic correction using adeno-associated virus vectors in the mammalian brain. Nat Genet. 8, 148-154 (1994).
- Harding, T. C., Dickinson, P. J., Roberts, B. N., Yendluri, S., Gonzalez-Edick, M., Lecouteur, R. A., Jooss, K. U. Enhanced gene transfer efficiency in the murine striatum and an orthotopic glioblastoma tumor model, using AAV-7- and AAV-8-pseudotyped vectors. Hum Gene Ther. 17, 807-820 (2006).
- Lo, W. D., Qu, G., Sferra, T. J., Clark, R., Chen, R., Johnson, P. R. Adeno-associated virus-mediated gene transfer to the brain: duration and modulation of expression. Hum Gene Ther. 10, 201-213 (1999).
- Lowery, R. L., Zhang, Y., Kelly, E. A., Lamantia, C. E., Harvey, B. K., Majewska, A. K. Rapid long-term labeling of cells in the developing and adult rodent visual cortex using double-stranded adeno-associated viral vectors. Dev Neurobiol. 69, 674-688 (2009).
