모니터링 살충제 저항 Bioassays

1. 소개 식량 생산은 2025 년까지 세계 80억4천만명 1 인구에 도달 것으로 실현과 최고의 중요성되고있다. 현재 생산보다 식품 작물의 큰 양을 공급 필요가있을 것입니다. 적절한 음식 가용성 작물 수확량의 수량을 향상시키고 품질을 유지하기 위해 살충제와 같은 식물 보호 제품의 사용하지 않고 가능하지 않습니다. 농약의 역사 및 현재의 신뢰를 바탕으로, 살충제 저항의 인스턴스가 발생할 계속되고 과학적 문헌에보고합니다. 제품이 높은 항복 및 고품질 생산 농업의 중요한 구성 요소이기 때문에 살충제로 해충 저항은 문제가있다. 하지만, 과용 및 / 또는 살충제의 오용은 농작물 생산에 해로운 수있는 저항의 발전으로 이어질 수 있습니다. 해충은 (즉, 곤충, 잡초, 병원균 등) 메커니즘의 다양한지만, 저항의 발전을위한 주요 운전 인자 사용할 행동의 독립 모드에 등록된 농약 1의 부족에 의해 저항을 개발할 수 있습니다. 몇 가지 제품이 특정 작물 시스템 내의 각 해충에 대해 표시하는 경우, 화학 제어 옵션이 제한됩니다. 따라서 같은 화학 물질 (들)은 반복적으로 사용되며 지속적인 선택 압력은 해충에 배치됩니다. 해충 하나 년에 여러 세대를 가지고 각 세대가 살충제에 노출되었을 때이 문제는 악화됩니다. 저항이와 관련된 금융 및 enrivornmental 비용 모두가 있습니다. 해충 저항 만족 제어를 달성하기 위해 필요한 높은 속도와 살충제를 더 자주 응용 프로그램에 연결됩니다. 항복 손실 때문에 대상 해충을 제어하는​​ 실패의 살충제 사용 증가 후에도 발생할 수 있습니다. Pimentel 2 연간 약 15억달러로 통합하는 미국의 살충제 저항 이러한 비용을 추정하고있다. 해충 집단 간의 살충제 자화율의 설문 조사는 살충제의 성능에 변화를 감지하고 화학 제어 전략을 수정하는 조기 경보를 제공하는 능동적인 접근이다. 전체 IPM 전략을 수정하여, 주어진 살충제의 생존은 차례로, 농업에 대한 세계 충분한 음식과 섬유질을 제공하기 위해 계속해서 중요한지, 확장 수 있습니다. 본 논문은 살충제 자화율을 모니터링하고 연락처 살충제에 대한 성인 유리병 테스트 3을 사용 살충제에 저항력이 인구의 개발과 공장 체계 살충제 4이 테스트의 수정을 감지하는 데 사용할 수있는 프로토콜을 설명합니다. 2. 방법 2.1 안전 정책 살충제를 처리하면 적절한 안전 조치를 사용하는 것이 중요합니다. 살충제를 처리하기 전에 적절한 개인 보호 장비 (PPE)에 대한 물질 안전 데이터 시트 (MSDS)를 참조하십시오. 실험실에서 살충제 처리에 대한 특정 실험실 훈련은 어떤 bioassays을 시도하기 전에 직원에 의해 요구되어야합니다. 2.2 만들기 스톡 솔루션 살충제 활성 성분 (AI)의 소스에서 알고있는 농도의 주식 솔루션을 개발할 수 있습니다. bioassay에 치료가 원래 주식 솔루션에서 만들 수 있으므로 원하는 모든 농도가 포함되어 있습니다. 본 논문, 100 μg / ML 솔루션의 100mls가 주식 솔루션으로 개발 될들의 관심을 가져 주셔서 있지만, 어떤 농도가 초기 농도의 희석 수 있습니다. %의 순도에 따라 무게로 기술 학년 AI의 양을 조정합니다. 금액은 무게로 = (수 있도록 볼륨) X ([# μg / ML 솔루션] / [% purity/100]) 예를 들어, 기술 AI의 10152.284 μg은 98.5 % 순도의 기술 학년 살충제의 100 μg / ML 솔루션 100 MLS해야 할 것입니다 : (100 ML) X ([100μg/ml] / 0.985) = 10152.284 μg 연락처 살충제에 대한 2.2.1 성인 비알 테스트 부분적으로 아세톤과 용적 플라스크를 입력하고 살충제 AI의 조정 금액을 달다. 무게 보트에서 모든 살충제를 제거하려면 술병에 아세톤과 체중 보트를 씻어. 아세톤과 졸업 라인 용적 플라스크를 채우십시오. 냉장 조건에서 열리는 대부분의 솔루션은 약 한 달 동안 효험없이 감지할 수있을 정도의 손실과 활동을 유지합니다. 체계적 살충제에 대한 성인 비알 시험 2.2.2 변경 체계적 살충제와 곤충의 중독증 연락 제품의와는 엄연히 다른 것입니다. 체계적 제품은 일반적으로 대신 직접 exposur을 가진 곤충의 활성화가 될 곤충에 의해 섭취되어야합니다연락처 살충제와 마찬가지로 제품에 전자. 따라서 성인 유리병 테스트는 테스트하는 체계 살충제 위해서으로 바뀌었습니다. 주식 솔루션에 필요한 AI의 무게는 섹션 2.2에서 설명한 것과 유사한 계산됩니다. 물 솔루션 : 방법론은 AI가 체중 벌꿀의 10 %에 녹아있는 경우를 제외하고, 비슷합니다. 이 솔루션은 bioassay의 개시 후 24 시간 이내에하여야한다. 아세톤 혼합 벌꿀에 추가 : 기술 등급 자료 수용성하지 않은 경우, 살충제 솔루션의 높은 농도는 살충제의 단지 작은 볼륨 그러한 아세톤과 함께 만들 수 수용액 4. 2.3 농도의 범위를 결정하고 개발 농도 bioassay에 대한 응답의 범위를 확립하는 데 필요한 적절한 농도를 결정하는 것은 어려울 수 있습니다. 여러 복제는 농도의 범위를 정의하기 위해 필요한 수 있으며 이것은 시행 착오에 의해 수행됩니다. 인구가 자화율 수준을 변경하는 경우 또한, 범위는 시간이 지남에 따라 변경될 수 있습니다. 많은 다른 요인이 최종 농도를 설립 고려하고 포함해야합니다 : 곤충의 가족, 살충제의 클래스는, 곤충의 크기 등 이전에 성인 유리병 시험 결과 살충제 농도의 초기 선택과 도움이 게시되었습니다. Thripidae 15; Coleoptera : Brentidae 16 Curculionidae 17 Coccinellidae 18-19과 Cybocephalidae 19, Diptera : Culicidae; Hemiptera : Thysanaptera Aleyrodiidae 5-6, Aphididae 7 Pentatomidae 80-10과 11-14 Miridae Bioassays가 출판되었습니다 20; Lepidoptera : Tortricidae 21 Noctuidae 3, 22-26, Hymenoptera : Braconidae 7,18, Ichneumonidae 26-27, Aphidiidae 18 Encyrtidae 7, Aphelinidae 18. 농도는 "X"μg / ML 솔루션을 기반으로 만들어집니다. 그러나 튜브는 성인 유리병 시험을 준비하는 경우에만 0.5ml 각 유리병에 추가됩니다; 따라서, 유리병의 농도가 절반 농도가 이루어집니다. 일단 농도가 선택되며, 다음과 같은 방정식이 솔루션의 양을 결정하는 도움이 것은 원하는 농도를 만들기 위해 추가되었습니다. (C1) (V1) = (C2) (V2) 어디 C1 주식 솔루션의 농도이며 C2가 준비되고있는 농도이며, V1은 새로운 농도를 만들기 위해 필요한 주식의 볼륨이고 V2는 새로운 농도의 볼륨입니다. 예를 들어, 100μg/ml 주식 솔루션의 5mls은 5μg/ml의 100mls를 만들기 위해 필요합니다. 이 5μg/ml 솔루션은 2.5μg/vial의 농도에 코팅된 튜브가 발생할 것입니다. 5mls = [(5μg/ml) (100mls)] / (100μg/ml) 연락처 살충제에 대한 2.3.1 성인 비알 테스트 부분적으로 원하는 농도를 만들기 위해 필요한 주식 솔루션의 계산된 금액을 용적 flaks를 기입하고, 나누어지는. 졸업 라인 아세톤과 체적 휴대용 술병을 입력하고 나중에 사용하기 위해 냉장고에 저장을위한 섹션 2.4 Parafilm M (알칸 병원, 니나, WI)과 인감을 참조하십시오. 대부분의 솔루션은 1 개월 좋다. 체계적 살충제에 대한 성인 비알 시험 2.3.2 변경 수용액은 아세톤에 대한 대체입니다 이전에 무게 벌꿀의 10 %를 제외하고 2.3.1에서 언급으로이 과정은 동일합니다. 수용액 모두 원하는 농도를 만들기 위해 : 충분한 벌꿀을 섞는다. 이러한 솔루션은 준비 후 24 시간 이내에 사용해야합니다. 튜브의 2.4 준비 연락처 살충제에 대한 2.4.1 성인 비알 테스트 농도가 냉장고에 저장되어있다면, 주위 온도로 따뜻하게 수 있습니다. 살충제 농도에 영향을 미칠 수 온도에 따라 아세톤 변화의 볼륨. 페인트 또는 마커를 사용하여 농도에 대한 컬러 코드 20 ML 유리 튜브 (스크류 캡을 위해 장착되어). 0.5ml/concentration를 제공하기 위해 반복 pipettor를 조정합니다. 가장 낮은 농도와 다음과 같은 모든 농도가 사용되었습니다 때까지 증가 농도와 지속, 아세톤 제어 작동하라. 작은 비커에 취급하는 튜브의 실제 숫자 (즉, 40 튜브에 대한 20mls)와 같은 솔루션의 약 절반 볼륨을 하거라. 솔루션은 사용하지 않을 때, 농도의 변화를 일으킬 수 있습니다 증발을 최소화하기 위해 그것을 커버. 반복 pipettor에 살충제 솔루션을 그리기 및 개별 유리 튜브에 0.5ml 솔루션을 분배. 즉시 치료 후, 유리 튜브는 상업 핫도그 롤러에 표시됩니다. 롤러의 회전으로 ​​유리 튜브는 기술 등급 살충제와 함께 코팅 유리병의 안쪽을 떠나, 아세톤 증발을 회전합니다. 열 D 수살충제를 egrade, 따라서 해제되는 열 것이 중요합니다. 이것은 가열과 동시에 구르고 동일한 스위치 또는 독립적으로 가열 요소와 롤러에 대한 스위치 작동이 핫도그 롤러의 모델을 사용하여 제어 모델의 가열 요소를 분리하여 어느 할 수 있습니다. 롤러가 보유 이상의 병을 치료하지 마십시오, 유리 튜브가 회전하고 그들이 유리 벽에도 코팅을받지 못할 수 있습니다 전에 아세톤이 증발 수 있습니다. 모든 아세톤이 증발 때까지 튜브가 회전하도록 허용합니다. 어쩌면 유리 벽면에 아세톤 – 결로의 벌금 레이어가 있으므로, 유리병은 개별적으로 검사해야합니다. 시간이 실험 조건에 따라 다릅니다 튜브를 롤 필요합니다. 일단 튜브가 건조 모자하고 냉장 또는 어두운 조건에서 하나를 저장할 수 있습니다. 곤충은 유리병의 입술 (즉, 표면 처리를 피하고) 아래 끊지 원뿔 라이너 또는 찢어진 호일 라이너와 뚜껑에 휴식 관찰되었습니다, 따라서 해제 늘어선 뚜껑을 사용하는 것이 중요합니다. 튜브를 준비하는 데 사용되지 않은 나머지 솔루션은 적절하게 처리하여야한다. 용적 플라스크에 남아있는 솔루션은 Parafilm과 함께 봉인하고 냉장고에 저장할 수 있습니다. 다른 살충제가 다른 선반의 생활을했기 때문에, 그들이 준비가되어 튜브를 날짜입니다. 예를 들어, pyrethroid – 코팅 튜브는 약 한 달 동안 좋다, 유기 인산 화합물과 같은,보다 불안정 살충제와 함께 코팅 튜브는 2 주 이하의 선반의 생명을 가지고 반면. 체계적 살충제에 대한 2.4.2 수정된 성인 비알 테스트 꽃 거품이 곤충 4 살충제 솔루션을 제공하는 기판으로서 필요합니다. 코크 송곳을 사용하여 꽃의 거품 (12mm X 12mm) 조각을 잘라. 이전에 설명한 유리 튜브에 꽃 거품 장소 한 조각. 0.5ml 솔루션을 제공하고 꽃의 거품에 하는걸 조정 반복 pipettor를 입력합니다. 액체의 부피 플로랄 폼의 조각을 포화해야하지만 유리병에 거품의 수준을 넘지 않아야합니다. 그리고 높은 농도로 최저 : 다시 제어 (수용액에만 무게 벌꿀 10 %)에서 순차적으로 작동합니다. 2.5. 저장 튜브 연락처 살충제에 대한 2.5.1 성인 비알 테스트 살충제 코팅 튜브를 저장할 때, 살충제의 속성을 알아. 다른 살충제와 같은 다양한 스토리지 요구 사항이 있습니다 pyrethroids 빛을 민감한하고 실온에서하지만 어둠에 저장할 수 있지만, 유기 인산 화합물 살충제는 온도에 민감한하고 냉동실에 보관해야합니다. 살충제는 냉동실에 보관해야하는 경우, 그들은 벌레를 노출하기 전에 실내 온도에 예열해야합니다. 2.6 Bioassay 테스트에 벌레를 수집합니다. 이 과정은 페로몬 – baited 트랩, 스위프 그물, 또는 대량 캡처의 다른 수단을 사용하여 수행할 수 있습니다. 이 기간 동안 음식과 수분 소스를 제공, 곤충은 수집 과정에서 부상자들을 위해 발생하는 자연스러운 죽음을 수 있도록 8 – 24 개최한다. 큰 테스트 곤충의 수가,보다 강력한 데이터 집합이있을 것이다; 농도 당 10-25 곤충 (10 최소) 테스트합니다. bioassay에 대한 곤충을 선택할 때, 건강한, 활동적인 개인을 선택하고 기면 또는 비정상적인 개인을 폐기. 그들은 전체 농도 범위와 시간에 안 한 농도에 노출되는 등 유리병에 넣어 곤충. 이 절차는 하나 가장 건강하고 활동적인 개인 또는 몇 농도를 놓는 것을 방지할 수 있습니다. 또한,이 농도 당 10 곤충의 최소 실험을 실시 불가 능할 경우, 각 농도 가능 한한 많은 노출. 그렇다면 짧은 시간 내에 동일한 샘플 영역 (2~3주)에서 더 많은 곤충을 수집하고 실험을 반복합니다. 일부 곤충은 농작물 시즌이 진행됨에 따라 자화율을 (저항을 구축) 잃을 수 있으므로, 이른 봄에 수집한 개인의 반응은 가을 28 수집과는 다를 수 있습니다. 사망률을 평가하는 기준을 개발할 수 있습니다. 죽어가는 혹은 죽은 곤충을 분류하는 데 사용되는 가장 일반적으로 사용되는 기준은 조정 운동 부족입니다. 이러한 관찰은 1m 또는 부드럽게 둔탁한 prodded 조정 운동의 부족 조정 비행을 유지할 수 없다는 등의 표면에 위치하는 경우 자체 오른쪽에있는 무능력을 포함할 수 있습니다. 개별 바로 그 자체지만, 쓰러져서 수 없다면, 아무 조정 움직임은 없습니다, 곤충이 죽은 것으로 간주되어야합니다. 곤충은 매끄러운 표면에 자체 righting 문제가 발생할 수 있습니다, 그것 자체가 오른쪽에 필요한 견인을 얻을 수 있습니다 있도록 그러므로, 그것은 아마도 필요한 곤충에게 표면을 공급합니다. 의 개수를 기록생존자 각 농도에 대한 survivorship을 계산 죽은 개인. 연락처 살충제에 대한 2.6.1 성인 비알 테스트 약병에 벌레 (들)을 놓고 느슨하게 뚜껑을 확보. 뚜껑 탈출에서 곤충을 방지하지만, 공기 흐름을 허용하도록 충분히 느슨하게해야합니다. 대부분의 곤충 bioassays 들어, 단 한 곤충은 각 유리병에 배치되지만, 작은 곤충, 예를 들어 whiteflies 또는 thrips는 유리병 6, 15 퍼센트 많은 30 개인의 비율로 노출될 수 있습니다. 곤충이 bioassay의 종점에서 사망률에 대한 평가까지 실온에서 수직으로 튜브를 삽입합니다. 노출 시간은 종 그리고 아마도 살충제 3,5-27과 다를 수 있습니다. 새로운 곤충이나 화학 물질과 함께 초기 독성 수준을 확립하는 과정에서, 노출 후 여러 예정 시간 지점에서 대상을 모니터링합니다. 시험은 여전히​​ 비 살충제 처리 제어 높은 survivorship을 (<10 % 사망률) 유지하면서 높은 농도에서 사망률이 100 % 경우 종료될 수있다. 100 % 사망률이 컨트롤에 높은 survivorship 가장 높은 농도에 도달하지 않으면, bioassay은 높은 농도의 범위를 사용하여 반복해야합니다. 이상적으로, 사망률 수준은 살충제 농도 증가로 증가한다. 일부 곤충은 24 시간 동안 노출되면 수분의 원천 (즉, 식물의 작은 조각) 12 필요합니다. 섬세한 곤충 작업 때, 그것은 곤충이 성인 유리병 테스트에 살충제 노출하기 전에 수분의 소스없이 유리병에서 살아남기 얼마나 결정하기 위해 유용합니다. 이 정보는있는 유리병과 수분 소스없이 곤충을 배치하고 실제 살충제 설문 조사를 실시하기 전에 시간이 경과함에 따라 생존을 모니터링하여 결정하실 수 있습니다. 체계적 살충제에 대한 2.6.2 수정된 성인 비알 테스트 수용액 살충제의 부재에서 : 곤충은 꿀이 포화 꽃 거품을 먹고 살 수있는 경우 bioassay의 개시 이전에, 확인하십시오. 물만 (또는 꿀 : 비 수용성 기술 등급 살충제 농도를 준비에 사용되는 아세톤의 가장 큰 볼륨과 물) 꽃 거품과 함께 유리병에 넣어 곤충, 여보와 포화와 며칠 동안 survivorship를 모니터링합니다. 성인 유리병 시험이 수정은 Miridae 4 Pentatomidae 29 검사되었습니다, 따라서, 테스트 기간을 결정하는 것은 접촉 살충제 bioassay에 대한보다 더 많은 실험이 필요합니다. 예를 들어, Lygus lineolaris는 (Palisot 드 Beauvois) thiamethoxam에 노출 후 24 시간에서 사망률에 대한 평가하지만, imidacloprid 4 72시간.했습니다 Oebalus pugax F.의 사망률 dinotefuran 29 노출되면 96시간에서 평가되었다. 따라서, 제어 튜브 안에 벌레 survivorship는 만들 수 있습니다 살충제 중독에서 정확한 사망 등급 전에 며칠 동안 지속적으로 높은해야합니다. 포화 꽃 거품과 함께 섬광 약병에 벌레 (들)을 놓으십시오. 대신 뚜껑있는 유리병을 씰링의 목화 공을 튜브를 밀봉합니다. 곤충이 사망률에 대한 평가까지 실온에서 수직으로 튜브를 삽입합니다. 일정한 간격으로 이전에 언급한 속도 사망. 컨트롤에 높은 survivorship (<10 % 사망률)로 가장 높은 농도 100 %의 사망률가있을 때 시험이 종료될 수있다. 그것은 추가적인 농도를 테스트해야 할 수도 있습니다. 2.6.3 데이터 분석 애보트 30에 따라 수식을 사용하여 제어 치료 사망률에 대한 정확한. 수정된 사망률 (%) = ((% 서바이벌 제어 – %의 생존 치료) / %의 생존 제어) X 100 인구의 50 % (LC 50) 죽이고 95 % 신뢰 간격 (CL)을 수립하는 데 필요한 치명적인 농도를 결정하기 위해 로그 선량 probit을 사용하여 데이터를 분석할 수 있습니다. 여러 소프트웨어 프로그램은 LC 50 (: PROC의 PROBIT 31 폴로 플러스 32 SAS)를 결정하기 위해 사용할 수 있습니다. 3. 노트 부정적인 흐름 공기 후드 아래에 아세톤과 살충제와 함께 작동합니다. 용적 flasks을 작성하면 아세톤 두 세척 병을 가지고하는 것이 좋습니다. 빠른 액체의 전달 및 느린 배달 하나 맞게되었습니다 세차 병. 더 큰 개방을 만들 배달 팔 부분을 제거하고이 병 신속하게 대량의 전송에 사용될 수 있습니다. 일단 아세톤은 졸업 라인 변경 병에 nears하고 적절있는 금액을보다 효율적으로 제어할 수 있도록 느린 전송로 세척 병을 사용합니다. 플라스크가 졸업 라인 위에 가득 경우, 상단을두고 아세톤은 졸업 라인 증발 수 있습니다. 양을에게 니 참고당신이 휴대용 술병을 채울 경우, 농도, 즉 준비에 필요한 주식 솔루션 어 방식 됐나요하지만 30mls 추가할 필요가, 당신은 졸업 라인을 통해 갈 수 있습니다.