SC1 funciones a través de la inhibición dual de Ras-GAP y ERK1. Pusimos a prueba la función de SC1 en el apoyo de células ES de ratón de auto-renovación en la ausencia de LIF y demostró que SC1 es capaz de mantener la auto-renovación de los cultivos celulares de ratón ES.
Madre embrionarias de ratón (ES) las células son cultivadas convencionalmente con factor inhibidor de leucemia (LIF) para mantener la auto-renovación.<sup> 1</sup> Sin embargo, LIF es caro y la activación de la vía LIF/JAK/STAT3 no es absolutamente necesario para mantener el estado de auto-renovación.<sup> 2</sup> La molécula pequeña SC1 puede ser una alternativa económica a LIF. SC1 funciones a través de la inhibición dual de Ras-GAP y ERK1.<sup> 3</supIlustración> de su mecanismo de acción hace que sea una herramienta útil para estudiar el mecanismo molecular fundamental de la auto-renovación. Aquí se demuestra el procedimiento para el cultivo de células madre embrionarias de ratón en presencia de SC1 y demostrar que son capaces de mantener la auto-renovación en la ausencia de LIF. Las células cultivadas con SC1 mostró morfología similar en comparación con las células mantenidas con LIF. Ambos mostraron una morfología típica madre embrionarias de ratón después de cinco pasajes. Típica expresión de marcadores de pluripotencia (Oct4, Sox2, Nanog, y SSEA1) se observó después de cinco pasajes de la presencia de SC1. Además, SC1 no causó toxicidad manifiesta en las células madre embrionarias de ratón.
El SC1 pequeñas moléculas se pueden utilizar para mantener la auto-renovación, con un estado indiferenciado de las células madre embrionarias de ratón. Antes de utilizar en una línea celular no probado, sin embargo, deben ser valorados para determinar la concentración óptima. Por ejemplo, hemos probado tres concentraciones en el ratón de células ES R1 línea ESC. 100 nm y 300 nm concentraciones fueron capaces de sostener células ES de ratón, sin embargo, una concentración de 1 M era tóxico.
SC1 también se puede utilizar bajo condiciones de alimentación libre.
The authors have nothing to disclose.
Los autores desean agradecer al Dr. Sheng Ding, del Instituto Scripps de Investigación y el Dr. Deng Hongkui de la Universidad de Pekín por su ayuda y dirección.
Material Name | Type | Company | Catalogue Number | Comment |
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SC1 | Stemgent | 04-0011 | ||
LIF | Millipore | ESG1107 | ||
SSEA-1 antibody | Santa Cruz | 21702 | ||
Nanog antibody | Abcam | ab21603 | ||
Sox2 antibody | Chemicon | Ab5603 | ||
Oct4 antibody | Santa Cruz | SC-5279 |