SC1 funzioni attraverso la doppia inibizione di Ras-GAP e ERK1. Abbiamo testato la funzione di SC1 nel sostenere ES cellule del mouse di auto-rinnovamento, in assenza di LIF e ha dimostrato che SC1 è in grado di mantenere auto-rinnovamento delle colture di cellule ES topo.
Topo staminali embrionali (ES), le cellule sono coltivate in modo convenzionale con fattore inibente la leucemia (LIF) per mantenere l'auto-rinnovamento.<sup> 1</sup> Comunque, LIF è costoso e l'attivazione del pathway LIF/JAK/STAT3 non è assolutamente necessaria per mantenere l'auto-rinnovamento dello Stato.<sup> 2</sup> Il SC1 piccola molecola potrebbe essere un'alternativa economica a LIF. SC1 funzioni attraverso la doppia inibizione di Ras-GAP e ERK1.<sup> 3</supIllustrazione> del suo meccanismo d'azione lo rende uno strumento utile per studiare il meccanismo molecolare fondamentale di auto-rinnovamento. Qui mostriamo la procedura per la coltura delle cellule di topo ES in presenza di SC1 e dimostrare che sono in grado di mantenere auto-rinnovamento, in assenza di LIF. Cellule in coltura con SC1 mostrato morfologia simile rispetto alle cellule mantenute con LIF. Entrambi i quali dimostrano tipica morfologia ES del mouse dopo cinque passaggi. Tipica espressione di marcatori di pluripotenza (Oct4, Sox2, Nanog, e SSEA1) è stata osservata dopo cinque passaggi in presenza di SC1. Inoltre, SC1 non ha causato tossicità manifesta in cellule staminali embrionali del mouse.
Il SC1 piccola molecola può essere utilizzata per mantenere auto-rinnovamento con uno stato indifferenziato delle cellule ES mouse. Prima di utilizzare su una linea cellulare non testato, comunque, dovrebbe essere titolato per determinare la concentrazione ottimale. Per esempio, abbiamo testato tre concentrazioni sulla cellula del mouse ES linea ESC R1. 100 nM e 300 nM concentrazioni sono stati in grado di sostenere le cellule staminali embrionali del mouse, invece, una concentrazione 1 mM era tossico.
SC1 può essere utilizzato anche sotto alimentatore senza condizioni.
The authors have nothing to disclose.
Gli autori desiderano ringraziare il Dr. Sheng Ding di The Scripps Research Institute e il dott Hongkui Deng dell'Università di Pechino per la loro assistenza e direzione.
Material Name | Type | Company | Catalogue Number | Comment |
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SC1 | Stemgent | 04-0011 | ||
LIF | Millipore | ESG1107 | ||
SSEA-1 antibody | Santa Cruz | 21702 | ||
Nanog antibody | Abcam | ab21603 | ||
Sox2 antibody | Chemicon | Ab5603 | ||
Oct4 antibody | Santa Cruz | SC-5279 |