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Caracterização no nível molecular usando abordagens bioquímicas robustas de uma nova proteína quinase
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JoVE Journal Bioquímica
Characterization at the Molecular Level using Robust Biochemical Approaches of a New Kinase Protein

Caracterização no nível molecular usando abordagens bioquímicas robustas de uma nova proteína quinase

DOI:
10.3791/59820-v

•

11:23 min

•

June 30, 2019

•

, , ,
1Centre de Biophysique Moléculaire, CNRS, UPR 4301,University of Orléans and INSERM

Capítulos

  • 00:04Título
  • 01:24Transient Transfections
  • 03:21Lysis
  • 05:17Immunoprecipitation
  • 06:59Coimmunoprecipitation Analyses
  • 08:33Results: Synthesized LIMK2-1 Protein, Its Interaction with Kinase ROCK, its Kinase Activity
  • 10:10Conclusion

Summary

Tadução automática

Tadução automática

Nós caracterizamos uma proteína nova da quinase usando aproximações bioquímicas robustas: análise ocidental do borrão com um anticorpo específico dedicado em linhas e em tecidos diferentes da pilha, interações por experimentos do coimmunoprecipitação, atividade da quinase detectada por ocidental Blot usando um anticorpo fosho-específico e por γ [32P] rotulagem ATP.

Tags

ImmunoprecipitationKinaseProtein ActivitySubstrateP32-ATP LabelingInhibitorLysis ConditionsNegative ControlCell CultureTransfectionCalcium Phosphate

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