Alimentação FITC-Dextran: Um método para quantificar a permeabilidade intestinal em C. elegans

Published: April 30, 2023

Abstract

Fonte: Le, T. A. N., et al. Medindo os efeitos de bactérias e produtos químicos na permeabilidade intestinal de caenorhabditis elegans. J. Vis. Exp. (2019). 

Este vídeo introduz um método para visualizar e medir a integridade do lúmen intestinal C. elegans alimentando vermes fitc rotulados dextran.  O protocolo de exemplo mostra o ensaio feito com vermes tratados com 3,3′-diindolylmetano (DIM) e alimentados por patógenos.

Protocol

Este protocolo é um trecho de Le et al, Medindo os Efeitos de Bactérias e Produtos Químicos sobre a Permeabilidade Intestinal de Caenorhabditis elegans, J. Vis. Exp. (2019). Preparação de placas de NGM para testar os efeitos de um produto químico (DIM) na P…

Representative Results

Figura 1: O efeito do DIM na permeabilidade intestinal de C. elegans alimentado P. aeruginosa. Imagens de microscopia de vermes de (A) E. coli OP50 sem alimentação FITC-dextran, (B) E. coli com alimentação FITC-dextran, (C) P. aeruginosa</em…

Materials

3,3’-diindolylmethane  Sigma D9568
90×15 mm Petri dishes SPL Life Sciences, South Korea 10090
Bactor Agar Beckton Dickinson REF. 214010
Formaldehyde solution  Sigma F1635
Caenorhabditis elegans N2 Caenorhabditis Genetics Center (CGC) Wild type 
Cholesterol Sigma C3045
Costa Assay Plate, 96 Well Black With Clear Flat Bottom Non-treated, No Lid Polystyrene Corning Incorporated REF. 3631
Dimethyl sulfoxide Sigma D2650
Escherichia coli OP50 Caenorhabditis Genetics Center (CGC)
Fluorescein isothiocyanate – dextran Sigma FD10S
Harmony software  PerkinElmer verson 3.5
Magnesium sulfate heptahydrate  Fisher Bioreagents BP2213-1
Fluoromount aqueous mounting medium Sigma F4680
Operetta CLS High-Content Analysis System PerkinElmer  HH16000000
Peptone Merck EMD 1.07213.1000
Pseudomonas aeruginosa PA01 Korean Collection for Type Culture KCTC NO. 1637
Sodium Chloride Fisher Bioreagents BP358-1
Stereo Microscope Nikon, Japan SMZ800N

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Citar este artigo
FITC-Dextran Feeding: A Method to Quantify Intestinal Permeability in C. elegans. J. Vis. Exp. (Pending Publication), e20167, doi: (2023).

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