FITC-Dextran Feeding: Eine Methode zur Quantifizierung der Darmdurchlässigkeit in C. elegans

Published: April 30, 2023

Abstract

Quelle: Le, T. A. N., et al. Messung der Auswirkungen von Bakterien und Chemikalien auf die Darmdurchlässigkeit von Caenorhabditis elegans. J. Vis. (2019). 

Dieses Video stellt eine Methode zur Visualisierung und Messung der Integrität des C. elegans Darmlumendurchfütterer durch Fütterung von Würmern mit FITC-beschrifteter Dextran vor.  Das Beispielprotokoll zeigt den Assay mit 3,3′-Diindolylmethan (DIM)-behandelten und pathogen gefütterten Würmern.

Protocol

Dieses Protokoll ist ein Auszug aus Le et al, Messung der Auswirkungen von Bakterien und Chemikalien auf die Darmdurchlässigkeit von Caenorhabditis elegans, J. Vis. Exp. (2019). Herstellung von NGM-Platten zur Prüfung der Auswirkungen einer Chemikalie (DIM) auf…

Representative Results

Abbildung 1: Die Wirkung von DIM auf die Darmdurchlässigkeit von C. elegans gefüttert P. aeruginosa. Mikroskopiebilder von Würmern aus (A) E. coli OP50 ohne FITC-dextran Fütterung, (B) E. coli mit FITC-dextran Fütterung, (C) P. aeruginosa</…

Materials

3,3’-diindolylmethane  Sigma D9568
90×15 mm Petri dishes SPL Life Sciences, South Korea 10090
Bactor Agar Beckton Dickinson REF. 214010
Formaldehyde solution  Sigma F1635
Caenorhabditis elegans N2 Caenorhabditis Genetics Center (CGC) Wild type 
Cholesterol Sigma C3045
Costa Assay Plate, 96 Well Black With Clear Flat Bottom Non-treated, No Lid Polystyrene Corning Incorporated REF. 3631
Dimethyl sulfoxide Sigma D2650
Escherichia coli OP50 Caenorhabditis Genetics Center (CGC)
Fluorescein isothiocyanate – dextran Sigma FD10S
Harmony software  PerkinElmer verson 3.5
Magnesium sulfate heptahydrate  Fisher Bioreagents BP2213-1
Fluoromount aqueous mounting medium Sigma F4680
Operetta CLS High-Content Analysis System PerkinElmer  HH16000000
Peptone Merck EMD 1.07213.1000
Pseudomonas aeruginosa PA01 Korean Collection for Type Culture KCTC NO. 1637
Sodium Chloride Fisher Bioreagents BP358-1
Stereo Microscope Nikon, Japan SMZ800N

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Citar este artigo
FITC-Dextran Feeding: A Method to Quantify Intestinal Permeability in C. elegans. J. Vis. Exp. (Pending Publication), e20167, doi: (2023).

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