Cuticula disruptie: een methode om hemolymph te verzamelen van Drosophila larven
Published: April 30, 2023
Abstract
Bron: Reimels, T. A. en Pfleger, C.M. Methoden om de lymfklier en hemocyten in drosophilalarven te onderzoeken. J.Vis. Exp. (2016).
De Drosophila hemolymph dient als zowel bloed als interstitiële vloeistof en circuleert door het hele lichaam tijdens de larve- en volwassen stadia. Deze video beschrijft een protocol om larvale hemolymph te verzamelen om de circulerende cellen te kwantificeren.
Protocol
Dit protocol is een fragment uit Reimels en Pfleger, Methods to Examine the Lymph Gland and Hemocytes in Drosophila Larvae, J. Vis. Exp. (2016). 1. Circulerende hemocytconcentratie Om larven van ongeveer hetzelfde ontwikkelingsstadium voor deze test te verkrijgen, beperkt u de eierverzameling door vrouwtjes toe te staan eieren te leggen voor een vaste periode van 2 – 6 uur. Verzamel larven in ontledende schotelputten gevuld met 1x fosfaat gebufferde zoutop…
Materials
| PBS tablets | MP Biomedicals | 2810305 | |
| dissecting dish | Corning | 7220-85 | |
| microcentrifuge tube | Denville | C2170 | |
| silicone dissecting pad, made from Sylgard 184 kit | Krayden (distributed through Fisher) | NC9644388 (Fisher catalog number) | Made in petri dish by mixing components of Sylgard elastomer kit according to manufacturer instructions. |
| stereomicroscope | Morrell Instruments (Nikon distributor) | mna42000, mma36300 | Nikon models SMZ1000 and SMZ645 |
| tissue wipe | VWR | 82003-820 | |
| forceps | Electron Microscopy Sciences | 72700-DZ | |
| p200 pipette | Eppendorf | 3120000054 | |
| Countess Automated Cell Counter | Invitrogen | C10227 | |
| Countess cell counting chamber slides | Invitrogen | C10283 | |
| hemocytometer | Hausser Scientific | 3200 | |
| trypan blue stain | Life Technologies | T10282 |
Citar este artigo
Cuticle Disruption: A Method to Collect Hemolymph from Drosophila Larvae. J. Vis. Exp. (Pending Publication), e20126, doi: (2023).