Una caratteristica della malattia di Alzheimer è l'elevazione di Aβ<sub> 1-42</sub> Peptide. Qui forniamo un protocollo per la preparazione di Aβ sintetico<sub> 1-42</sub> Oligomeri, che danneggia dell'ippocampo potenziamento a lungo termine, un cellulare correlato di memoria. Questa procedura è utile per lo studio dei meccanismi di Aβ indotta lo screening della patologia e della droga.
Riduzione di valore delle connessioni sinaptiche è probabile che alla base della amnesico sottili cambiamenti che si verificano nelle prime fasi del morbo di Alzheimer s (AD). β-amiloide (Aβ), un peptide prodotto in grandi quantità in AD, è noto per ridurre potenziamento a lungo termine (LTP), un cellulare correlato di apprendimento e memoria. Infatti, compromissione LTP causata da Aβ è un utile paradigma sperimentale per lo studio delle disfunzioni sinaptiche nei modelli dC e lo screening per i farmaci in grado di mitigare tali menomazioni o ritorno sinaptica. Studi hanno dimostrato che Aβ produce l'interruzione LTP preferenzialmente attraverso la sua forma oligomerici. Qui forniamo un protocollo dettagliato per LTP da compromettere la perfusione di oligomerized sintetico Aβ1-42 peptide su fettine di ippocampo acuta. In questo video, delineiamo un passo-passo procedura per la preparazione di Aβ oligomerici<sub> 1-42</sub>. Poi, seguiamo un esperimento individuale in cui è ridotta LTP in fettine di ippocampo esposti a Aβ oligomerized<sub> 1-42</sub> Rispetto a fette in un esperimento di controllo dove non Aβ<sub> 1-42</subEsposizione> era accaduto.
Come descritto in precedenza, diversi problemi nella preparazione di Aβ oligomerici può provocare LTP inalterata. Un modo per valutare se il degrado Aβ o la mancanza di oligomerizzazione Aβ potrebbe essersi verificato è quello di valutare la preparazione Aβ con TRIS-Tricine PAGE / analisi Western Blotting e ultracentrifugazione analitica (non descritte in questo protocollo). Quando Western Blotting campioni sono preparati in condizioni non-denaturing/non-reducing, una preparazione di successo dovrebbe generare una…
The authors have nothing to disclose.
Questo lavoro è stato sostenuto da NIH National Institute of Neurological Disorder and Stroke (NINDS) (NS049442).>
Material Name | Tipo | Company | Catalogue Number | Comment |
---|---|---|---|---|
Aβ 1-42 (lyophilized) | American Peptide Co. | 62-0-80 | ||
1,1,1,3,3,3-Hexafluoro-2-Propanol (HFIP) | Fluka | 52517 | ||
Dimethylsulfoxide (DMSO) | Biotium | 90082 | ||
50mL Polypropylene Centrifuge Tubes | Corning | 05-538-67 | ||
1.5ml MaxyClear microtubes Maximum recovery | Axygen | MCT-150-L-C | ||
Phosphate-Buffered Saline pH 7.4 | Invitrogen-Gibco | 10010-023 | ||
GASTIGHT Syringes 250 μL | Hamilton | 1725 | ||
Bath sonicator | Branson | 3510 | ||
Savant SpeedVac Concentrator System | Various distributors | SC 110A |