Préparation des oligomères β-amyloïde 1-42 Et induction de la plasticité synaptique Dépréciation sur les coupes d'hippocampe
Summary
Une caractéristique de la maladie d'Alzheimer est l'élévation de Aß<sub> 1-42</sub> Peptide. Ici nous fournissons un protocole pour la préparation de Aß synthétique<sub> 1-42</sub> Oligomères, ce qui altère l'hippocampe potentialisation à long terme, une corrélation cellulaires de la mémoire. Cette procédure est utile pour étudier les mécanismes de Aß induite par le dépistage de pathologie et de drogue.
Abstract
Dépréciation des connexions synaptiques est susceptible de sous-tendent les changements subtils amnésique survenant dès les premiers stades de la maladie d'Alzheimer (MA). β-amyloïde (Aß), un peptide produit en grandes quantités dans la MA, est connue pour réduire potentialisation à long terme (LTP), un téléphone cellulaire corrélat de l'apprentissage et la mémoire. En effet, la dépréciation causée par Aßi LTP est un paradigme expérimental utile pour l'étude des dysfonctionnements synaptiques dans les modèles AD et pour le dépistage des drogues capables d'atténuer ou de revenir de telles déficiences synaptiques. Des études ont montré que Aßi produit la perturbation LTP préférentiellement via sa forme oligomérique. Ici, nous fournir un protocole détaillé pour la LTP compromettre par une perfusion de oligomérisés synthétiques Aβ1-42 peptide sur aigus coupes d'hippocampe. Dans cette vidéo, nous présentons une procédure étape par étape pour la préparation des oligomères Aßi<sub> 1-42</sub>. Puis, nous suivons une expérience individuelle dans laquelle la LTP est réduite dans des coupes d'hippocampe exposée à Aßi oligomérisés<sub> 1-42</sub> Par rapport à tranches dans une expérience de contrôle où aucune Aßi<sub> 1-42</sub> L'exposition avait eu lieu.
Protocol
Discussion
Comme décrit ci-dessus, plusieurs problèmes dans la préparation de Aßi oligomérique peut entraîner la LTP intacte. Une façon d'évaluer si la dégradation de l'Aß ou le manque d'oligomérisation Aßi a pu se produire est d'évaluer la préparation à l'aide Aßi TRIS-Tricine PAGE / Western blotting et l'analyse ultracentrifugation analytique (non décrite dans ce protocole). Lorsque occidentale échantillons Blotting sont préparés dans des conditions non-denaturing/non-reducing, une pr?…
Declarações
The authors have nothing to disclose.
Acknowledgements
Ce travail a été soutenu par le NIH Institut national des troubles neurologiques et des maladies (NINDS) (NS049442).>
Materials
| Material Name | Tipo | Company | Catalogue Number | Comment |
|---|---|---|---|---|
| Aβ 1-42 (lyophilized) | American Peptide Co. | 62-0-80 | ||
| 1,1,1,3,3,3-Hexafluoro-2-Propanol (HFIP) | Fluka | 52517 | ||
| Dimethylsulfoxide (DMSO) | Biotium | 90082 | ||
| 50mL Polypropylene Centrifuge Tubes | Corning | 05-538-67 | ||
| 1.5ml MaxyClear microtubes Maximum recovery | Axygen | MCT-150-L-C | ||
| Phosphate-Buffered Saline pH 7.4 | Invitrogen-Gibco | 10010-023 | ||
| GASTIGHT Syringes 250 μL | Hamilton | 1725 | ||
| Bath sonicator | Branson | 3510 | ||
| Savant SpeedVac Concentrator System | Various distributors | SC 110A |
Referências
- Stine, W. B., Dahlgren, K. N., Krafft, G. A., LaDu, M. J. In vitro characterization of conditions for amyloid-beta peptide oligomerization and fibrillogenesis. J Biol Chem. 278, 11612-11622 (2003).
- Vitolo, O. V. Amyloid beta -peptide inhibition of the PKA/CREB pathway and long-term potentiation: reversibility by drugs that enhance cAMP signaling. Proc Natl Acad Sci U S A. 99, 13217-13221 (2002).
- Puzzo, D. Picomolar amyloid-beta positively modulates synaptic plasticity and memory in hippocampus. J Neurosci. 28, 14537-14545 (2008).
- Lewczuk, P. Effect of sample collection tubes on cerebrospinal fluid concentrations of tau proteins and amyloid beta peptides. Clin Chem. 52, 332-334 (2006).
- Masliah, E. Mechanisms of synaptic dysfunction in Alzheimer’s disease. Histol Histopathol. 10, 509-519 (1995).
- Cullen, W. K., Suh, Y. H., Anwyl, R., Rowan, M. J. Block of LTP in rat hippocampus in vivo by beta-amyloid precursor protein fragments. Neuroreport. 8, 3213-3217 (1997).
- Itoh, A. Impairments of long-term potentiation in hippocampal slices of beta-amyloid-infused rats. Eur J Pharmacol. 382, 167-175 (1999).
- Walsh, D. M. Naturally secreted oligomers of amyloid beta protein potently inhibit hippocampal long-term potentiation in vivo. Nature. 416, 535-539 (2002).
- Lambert, M. P. nonfibrillar ligands derived from Abeta1-42 are potent central nervous system neurotoxins. Proc Natl Acad Sci U S A. 95, 6448-6453 (1998).
- Gong, B. Ubiquitin hydrolase Uch-L1 rescues beta-amyloid-induced decreases in synaptic function and contextual memory. Cell. 126, 775-788 (2006).
- Trinchese, F. Inhibition of calpains improves memory and synaptic transmission in a mouse model of Alzheimer disease. J Clin Invest. 118, 2796-2807 (2008).
