Espectroscopia de Ressonância Magnética de viver Drosophila melanogaster Usando Angle Spinning Magia
Summary
Esta técnica permite o uso de alta resolução, ângulo mágico de prótons girando MR espectroscopia (HRMAS 1H-MRS) para a caracterização molecular de viver<em> Drosophila melanogaster</em> Com um espectrômetro convencional 14,1 tesla equipado com uma sonda HRMAS.
Abstract
Alta Resolução Angle Spinning Magia (HRMAS) espectroscopia de prótons por ressonância magnética (<sup> 1</sup> H-MRS) é uma técnica não destrutiva romance que melhora espectral da linha de larguras e permite que espectros de alta resolução a ser obtido a partir de extratos, células intactas, culturas de células, tecidos e mais importante ainda intacta para investigar as relações entre metabolitos e processos celulares.<em> In vivo</em> HRMAS<sup> 1</sup> H-MRS estudos ainda não foram relatados na mosca da fruta ao vivo<em> Drosophila melanogaster.</em><em> Drosophila,</em> Como um simples organismo genética, permite que as múltiplas funções biológicas e vários evolutivamente conservadas vias de sinalização a ser examinada em nível organismo inteiro e é um modelo útil para a investigação genética e fisiologia. Para este fim, desenvolvido e implementado um<em> In vivo</em> HRMAS<sup> 1</sup> H-MRS método para investigar ao vivo<em> Drosophila</em> 14,1 em T. Aqui, esboçamos uma HRMAS<sup> 1</sup> H-MRS protocolo para a caracterização molecular de<em> Drosophila</em> Com um espectrômetro MR convencional equipado com uma sonda HRMAS. Esta técnica é um romance,<em> In vivo,</em> Não-destrutivos<em> Drosophila</em> Abordagem de medição metabólito, que permite a identificação de biomarcadores da doença e, portanto, pode contribuir para o desenvolvimento terapêutico romance.
Protocol
Discussion
Com exceção do recente relatório sobre a viabilidade de ressonância magnética in vivo em moscas de fruta 6, in vivo MRS estudos em Drosophila ainda não foram relatados. No protocolo, descrevemos a implementação de um romance in vivo HRMAS uma abordagem H-MRS para a detecção de moléculas biologicamente importantes. Especificamente, nós detectamos lipídios e metabólitos em pequena viver Drosophila voa a 14,1 T em aproximadamente 45 min, o que…
Declarações
The authors have nothing to disclose.
Acknowledgements
Este trabalho foi financiado em parte por um Instituto Nacional de Saúde (NIH) para conceder AI063433 Laurence G. Rahme, um Instituto Nacional Institutes of Health (NIH) Centro de Grant (P50GM021700) para Ronald G. Tompkins (A. Aria Tzika, Diretor de o núcleo de RMN), e um Hospital Shriners para Crianças Bolsa de Investigação (# 8893) para A. Aria Tzika. Agradecemos a Dionyssios Mintzopoulos Ph.D. de assistência nas fases iniciais de desenvolvimento deste protocolo e Ovidiu C. Andronesi Ph.D. de assistência com a seqüência de pulso TOBSY.
Materials
| Material Name | Tipo | Company | Catalogue Number | Comment |
|---|---|---|---|---|
| Deuterium oxide | Reagent | Sigma-Aldrich | 7789-20-0 | |
| 3-(trimethylsilyl)propionic-2,2,3,3-d4 acid | Reagent | Sigma-Aldrich | 24493-21-8 | |
| agar, sucrose, yeast, cornmeal | Food | Genesee Scientific Corporation | http://www.flystuff.com/ | |
| Oregon RS or Canton-S flies | Adult fly lines | Bloomington Stock Center | http://flystocks.bio.indiana.edu/ | |
| Paintbrush | Equipment | (size 0) | ||
| 2ml tubes | Equipment | Fisher Scientific | K749521-1590 | |
| Fly incubators | Equipment | high humidity capacity (60-75%), adjustable temperature, and a 12 h:12 h light: dark cycle. | ||
| Bruker Bio-Spin Avance NMR spectrometer (600.13 MHz) 4mm triple resonance (1H, 13C, 2H) HRMAS probe | Equipment | Bruker Bio-Spin | ||
| BTO-2000 unit in combination with a MAS pneumatic unit | Equipment | Bruker Bio-Spin | ||
| 4mm zirconium oxide rotor (capacity 50 ul) | Equipment | Bruker Bio-Spin | B3829 (Bruker store) | |
| MestReC (Mestrelab Research) | Software | 1D NMR spectra analysis http://mestrelab.com/ |
||
| SPARKY 3, USCF | Software | 2D NMR spectra
analysis
http://www.cgl.ucsf.edu/home/sparky/ |
Referências
- Apidianakis, Y., Rahme, L. G. Drosophila melanogaster as a model host for studying Pseudomonas aeruginosa infection. Nat Protoc. 4, 1285-1294 (2009).
- Meiboom, S., Gill, D. Modified spin-echo method for measuring nuclear relaxation time. Rev Sci Instrum. 29, 688-691 (1958).
- Andronesi, O. C., Mintzopoulos, D., Struppe, J., Black, P. M., Tzika, A. A. Solid-state NMR adiabatic TOBSY sequences provide enhanced sensitivity for multidimensional high-resolution magic-angle-spinning 1H MR spectroscopy. J Magn Reson. 193, 251-258 (2008).
- Astrakas, L. G. Proton NMR spectroscopy shows lipids accumulate in skeletal muscle in response to burn trauma-induced apoptosis. Faseb J. 19, 1431-1440 (2005).
- Fan, T. W. M. Metabolite profiling by one- and two dimensional NMR analysis of complex mixtures. Prog Nuc Magn Reson Spec. 28, 161-219 (1996).
- Null, B., Liu, C. W., Hedehus, M., Conolly, S., Davis, R. W. High-resolution, in vivo magnetic resonance imaging of Drosophila at 18.8 Tesla. PLoS One. 3, e2817-e2817 (2008).
- Zektzer, A. S. Improved signal to noise in high-resolution magic angle spinning total correlation spectroscopy studies of prostate tissues using rotor-synchronized adiabatic pulses. Magn Reson Med. 53, 41-48 (2005).
