טכניקה זו מאפשרת את השימוש זווית ברזולוציה גבוהה קסם ספינינג פרוטון MR ספקטרוסקופיה (HRMAS 1H-MRS) לאפיון מולקולרי של חיים<em> תסיסנית melanogaster</em> עם קונבנציונלית 14.1 טסלה ספקטרומטר מצויד בדיקה HRMAS.
Abstract
ברזולוציה גבוהה קסם זווית ספינינג (HRMAS) פרוטון ספקטרוסקופיית תהודה מגנטית (<sup> 1</sup> H-MRS) היא טכניקה רומן הרסני המשפרת ספקטרלי, רוחב קו ומאפשר ברזולוציה גבוהה ספקטרה להיות המתקבל תמציות, תאים שלמים, תרביות תאים, ורקמות יותר שלם וחשוב לחקור את היחסים בין מטבוליטים ועל תהליכים תאיים.<em> ב-vivo</em> HRMAS<sup> 1</sup> H-MRS מחקרים טרם דווח על זבוב הפירות לחיות<em> תסיסנית melanogaster.</em><em> תסיסנית,</em> כאורגניזם גנטית פשוטה, מאפשר תפקודים ביולוגיים רבים ומגוונים מסלולי איתות שמור באבולוציה להיבחן ברמת האורגניזם השלם, וזה מודל שימושי לחקר הגנטיקה ופיזיולוגיה. לשם כך, פיתחנו ויישמנו<em> In vivo</em> HRMAS<sup> 1</sup> H-MRS שיטה לחקור לחיות<em> תסיסנית</em> ב 14.1 ט 'הנה, אנחנו המתאר HRMAS<sup> 1</sup> H-MRS פרוטוקול לאפיון מולקולרי של<em> תסיסנית</em> עם ספקטרומטר MR קונבנציונאלי מצויד בדיקה HRMAS. טכניקה זו היא רומן,<em> In vivo,</em> שאינו הרסני<em> תסיסנית</em> גישת מדידה המטבוליט, המאפשר זיהוי של סמנים ביולוגיים למחלה ולכן עשויים לתרום לפיתוח טיפולית חדשנית.
Protocol
חלק 1: תסיסנית הכנה מדידות HRMAS באמצעות תקן flylab נהלים 1, לאסוף החדש eclosing זבובים במשך 3 ימים ולהעביר אותם לטוס צלוחיות המכילות מזון לעוף טרי. דגירה הזבובים שנאספו במשך 5 ימים, כך הזבובים יהיה 5-8 ימים רק לפני הניסו?…
Discussion
למעט הדוח האחרון של היתכנות של MRI in vivo בפרי זבובים 6,in vivo גברת לימודי תסיסנית טרם דיווחו. בפרוטוקול הנוכחי, אנו מתארים את יישום רומן בגישה vivo HRMAS H-1 גברת לאיתור מולקולות חשובות מבחינה ביולוגית. במפורש, זיהינו שומנים מטבוליטים קטנים לחיות …
Declarações
The authors have nothing to disclose.
Acknowledgements
עבודה זו נתמכה בחלקה על ידי המכונים הלאומיים לבריאות (NIH) כדי להעניק AI063433 לורנס ג רחמה, מכון המכונים הלאומיים לבריאות (NIH) מרכז גרנט (P50GM021700) כדי רונלד ג טומפקינס (א 'אריה ציקה, מנהל הליבה NMR), ובית החולים של שריינרים לילדים מענק מחקר (# 8893) א 'אריה ציקה. אנו מודים Dionyssios Mintzopoulos Ph.D. סיוע בשלבים הראשונים של פיתוח זה פרוטוקול Ovidiu ג Andronesi Ph.D. לקבלת סיוע עם רצף הדופק TOBSY.
Righi, V., Apidianakis, Y., Rahme, L. G., Tzika, A. A. Magnetic Resonance Spectroscopy of live Drosophila melanogaster using Magic Angle Spinning. J. Vis. Exp. (38), e1710, doi:10.3791/1710 (2010).