Questa tecnica consente l'utilizzo di alta risoluzione magic angle spinning spettroscopia RM del protone (1H-MRS HRMAS) per la caratterizzazione molecolare di vivere<em> Drosophila melanogaster</em> Con un tradizionale 14,1 tesla spettrometro dotato di una sonda HRMAS.
Ad alta risoluzione magico angolo Spinning (HRMAS) spettroscopia di risonanza magnetica protonica (<sup> 1</sup> H-MRS) è una nuova tecnica non distruttiva che migliora spettrale linea larghezza e permette ad alta risoluzione da spettri ottenuti da estratti, di cellule intatte, colture cellulari e tessuti più importante intatto per indagare i rapporti tra i metaboliti e dei processi cellulari.<em> In vivo</em> HRMAS<sup> 1</sup> H-MRS studi devono ancora essere riportato nel moscerino della frutta dal vivo<em> Drosophila melanogaster.</em><em> Drosophila,</em> Come un organismo semplice genetica, permette molteplici funzioni biologiche e diverse vie di segnalazione evolutivamente conservata da esaminare a livello intero organismo ed è un modello utile per studiare la genetica e la fisiologia. A tal fine, abbiamo sviluppato e implementato un<em> In vivo</em> HRMAS<sup> 1</sup> H-MRS metodo per studiare dal vivo<em> Drosophila</em> Al 14,1 T. Qui, delineare un HRMAS<sup> 1</sup> H-MRS protocollo per la caratterizzazione molecolare di<em> Drosophila</em> Con uno spettrometro convenzionale RM dotato di una sonda HRMAS. Questa tecnica è un romanzo,<em> In vivo,</em> Non distruttiva<em> Drosophila</emApproccio di misura> metabolita, che consente l'identificazione di biomarcatori malattia e possono quindi contribuire al romanzo di sviluppo terapeutico.
Con l'eccezione del recente rapporto della fattibilità di risonanza magnetica in vivo nei moscerini della frutta 6, studi in vivo MRS in Drosophila non sono ancora stati segnalati. Nel presente protocollo, si descrive l'implementazione di un romanzo in vivo HRMAS 1 H-MRS approccio per la rilevazione di molecole biologicamente importanti. In particolare, abbiamo rilevato lipidi e metaboliti piccoli vivono Drosophila vola al 14,1 T in circa 45 min…
The authors have nothing to disclose.
Questo lavoro è stato sostenuto in parte da una National Institutes of Health (NIH) a concedere AI063433 Laurence G. Rahme, una Istituti National Institute of Health (NIH) Centro Grant (P50GM021700) di Ronald Tompkins G. (A. Tzika Aria, Direttore del il nucleo NMR), e un Ospedale per i bambini Shriner assegno di ricerca (# 8893) ad A. Aria Tzika. Ringraziamo Dionyssios Mintzopoulos Ph.D. per l'assistenza nelle fasi iniziali di sviluppo di questo protocollo e Ovidiu C. Andronesi Ph.D. per l'assistenza con la sequenza di impulsi TOBSY.
Material Name | Tipo | Company | Catalogue Number | Comment |
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Deuterium oxide | Reagent | Sigma-Aldrich | 7789-20-0 | |
3-(trimethylsilyl)propionic-2,2,3,3-d4 acid | Reagent | Sigma-Aldrich | 24493-21-8 | |
agar, sucrose, yeast, cornmeal | Food | Genesee Scientific Corporation | http://www.flystuff.com/ | |
Oregon RS or Canton-S flies | Adult fly lines | Bloomington Stock Center | http://flystocks.bio.indiana.edu/ | |
Paintbrush | Equipment | (size 0) | ||
2ml tubes | Equipment | Fisher Scientific | K749521-1590 | |
Fly incubators | Equipment | high humidity capacity (60-75%), adjustable temperature, and a 12 h:12 h light: dark cycle. | ||
Bruker Bio-Spin Avance NMR spectrometer (600.13 MHz) 4mm triple resonance (1H, 13C, 2H) HRMAS probe | Equipment | Bruker Bio-Spin | ||
BTO-2000 unit in combination with a MAS pneumatic unit | Equipment | Bruker Bio-Spin | ||
4mm zirconium oxide rotor (capacity 50 ul) | Equipment | Bruker Bio-Spin | B3829 (Bruker store) | |
MestReC (Mestrelab Research) | Software | 1D NMR spectra analysis http://mestrelab.com/ |
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SPARKY 3, USCF | Software | 2D NMR spectra
analysis
http://www.cgl.ucsf.edu/home/sparky/ |