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Ensaio de metilação de DNA acoplado à endonuclease à base de fluorescência contínua para triagem de inibidores da DNA metiltransferase
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Continuous Fluorescence-Based Endonuclease-Coupled DNA Methylation Assay to Screen for DNA Methyltransferase Inhibitors

Ensaio de metilação de DNA acoplado à endonuclease à base de fluorescência contínua para triagem de inibidores da DNA metiltransferase

DOI:
10.3791/62949-v

•

06:07 min

•

August 05, 2022

•

, ,
1Department of Chemistry,Bucknell University, 2Program in Cell Biology/Biochemistry,Bucknell University

Chapters

  • 00:05Introduction
  • 00:24Prepare Assay Solutions for the Screen
  • 01:48Prepare Enzyme Solutions for the Screen
  • 02:52Run the Methylation Assay and Analyze the Data
  • 04:29Results: Determination of Initial Velocities of DNA Methylation in the Presence and Absence of Potential Inhibitors
  • 05:40Conclusion

Summary

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As metiltransferases de DNA são potenciais alvos de drogas contra o câncer. Aqui, um protocolo é apresentado para avaliar pequenas moléculas para inibição da DNA metiltransferase. Este ensaio utiliza uma endonuclease para acoplar a metilação do DNA à geração de fluorescência e permite que a atividade enzimática seja monitorada em tempo real.

Tags

Continuous Fluorescence-based AssayEndonuclease-coupledDNA Methyltransferase InhibitorsPlate Reader AssayReal-time Data CollectionDNA MethylationSAMGlaIDNMT1DNA SubstrateInhibitor Screening

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