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Études des interactions chaperonne-cochapéroé à l’aide d’un essai homogène à base de billes
JoVE 신문
생화학
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JoVE 신문 생화학
Studies of Chaperone-Cochaperone Interactions using Homogenous Bead-Based Assay
DOI:

06:51 min

July 21, 2021

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Chapters

  • 00:04Introduction
  • 01:28Coupling of Hsp90 C-Terminal Peptide to the Acceptor Beads
  • 02:49Assay for Interaction Between GST-FKBP51 or GST-FKBP52 and Hsp90 C-Terminal Peptide and Inhibition with Small Molecular Mass Compounds
  • 04:14Dose-Response Curve Generation and IC50 Calculation
  • 04:58Results: Inhibitory Effect of Small Molecular Weight Test Compound D10
  • 05:59Conclusion

Summary

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Ce protocole présente une technique pour sonder les interactions protéine-protéine à l’aide de perles de donneur liées au glutathion avec des co-chaperons à motif TPR fusionnés GST et des perles accepteurs couplées à un peptide dérivé de Hsp90. Nous avons utilisé cette technique pour dépister de petites molécules afin de perturber les interactions Hsp90-FKBP51 ou Hsp90-FKBP52 et identifié des inhibiteurs puissants et sélectifs de l’interaction Hsp90-FKBP51.

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